mda-7/IL-24抑制肝癌生长侵袭和转移的研究

摘要

目的:
　　将重组腺病毒介导的mda-7/IL-24基因(melanoma differentiation-associated gene-7)转染高转移性人肝癌细胞HCCLM6,探索该基因治疗对肝癌细胞侵袭力的作用.并通过检测与侵袭转移相关的生化指标来寻找mda-7/IL-24基因抗肿瘤侵袭转移的可能机制。
　　方法:
　　构建携带人mda-7/IL-24的重组腺病毒载体(Ad-mda-7);培养高转移性人肝癌细胞HCCLM6;将所培养的对数期细胞分组(1)实验组:用携带人mda-7/IL-24的重组腺病毒载体(Ad-mda-7)干预高转移性人肝癌细胞HCCLM6(2)对照组:用PBS干预高转移性人肝癌细胞HCCLM6;显微镜下观察各组细胞的生长增殖;用transwell分别检测转染MDA-7/IL-24基因组和PBS干预组,高转移性人肝癌细胞HCCLM6侵袭力的不同;用RT-PCR分别检测转染MDA-7/IL-24基因组和PBS干预组各与侵袭转移相关的基因E-Cadherin,MMP-9和VEGF表达mRNA的表达水平;用Western Blot分别检测转染MDA-7/IL-24基因组和PBS干预组与侵袭转移相关的基因E-Cadherin,MMP-9和VEGF表达蛋白的水平,分析各组蛋白水平的变化。
　　结果:
　　1.成功构建重组腺病毒;
　　2.复制缺陷型腺病毒能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞中高效表达;
　　3.重组腺病毒介导的mda-7/IL-24基因能促使肝癌细胞凋亡.
　　4.重组腺病毒介导的mda-7/IL-24基因转染的高转移性人肝癌细胞HCCLM6与对照组相比较,其侵袭力有明显下降.
　　5.与对照组相比MDA-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞中VEGF和MMP-9的mRNA的表达,且有统计学意义(P均小于0.05)。
　　6.与对照组相比MDA-7/IL-24能明显促进肝癌细胞中E-Cadherin的mRNA的表达,且有统计学意义(P均小于0.05)。
　　7.与对照组相比MDA-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞中VEGF和MMP-9蛋白的表达,且有统计学意义(P均小于0.05)。
　　8.与对照组相比MDA-7/IL-24能明显促进肝癌细胞中E-Cadherin蛋白的表达,且有统计学意义(P均小于0.05)。
　　结论:
　　复制缺陷型腺病毒载体Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在高转移性人肝癌细胞M6中高效表达,促使肝癌细胞凋亡,抑制肝癌细胞的侵袭力,并下调VEGF和MMP-9的表达和上调E-Cadherin的表达,从而可能对肝癌转移有抑制作用,可能成为肝癌术后治疗的新途径,为降低肝癌的复发转移率带来希望。

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前言

参考文献

第一部分：携带MDA-7/IL-24基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞中的表达

引言

1材料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

第二部分 Ad-mda-7抑制肝癌细胞侵袭能力及其机制探索

引言

1材料与方法

2结果

3讨论

参考文献

综述:

致谢