白介素24对早孕滋养细胞侵蚀行为的影响及与妊娠期高血压疾病的关系

摘要

妊娠期高血压疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy)是妊娠期特有的疾病,是孕产妇和围生儿发病率和死亡率的主要原因。关于妊娠期高血压疾病的病因和发病机理一直是产科研究的重要课题,目前普遍认为胎盘浅着床和血管重铸障碍是妊娠期高血压疾病发病的中心环节。妊娠期间滋养细胞适时适量地增殖、分化、迁移、侵润和凋亡是胚胎着床和胎盘形成的关键,这一过程可能受到滋养细胞和局部微环境分泌物的精细调节,如果调节失控将导致滋养细胞生物学行为异常,从而引起妊娠期高血压疾病等一系列病理过程。
　　白介素24(interleukin24,IL-24),又称为黑色素瘤分化相关因子-7(MDA-7),是新发现的肿瘤抑制基因,具有促进肿瘤细胞凋亡、抑制血管形成等作用[1],同时对于癌细胞的侵袭和转移具有抑制作用。近年来对于IL-24的研究限于其对肿瘤细胞的抑制及促凋亡等作用,而关于它对滋养细胞生理功能影响及其在产科领域的研究尚未见报告。基于滋养细胞与肿瘤细胞生物学功能类似,在本研究中,我们研究了IL-24在正常妊娠母胎界面以及子痫前期胎盘中的表达及分布,同时在体外研究了IL-24对人绒毛外滋养细胞株(TEV-1)侵蚀功能的影响,旨在探讨IL-24与妊娠期高血压疾病的关系,进一步阐明滋养细胞侵蚀的可能机制,为防治病理性妊娠及其他疾病的方法提供实验基础和理论依据。
　　本文主要从以下两个部分展开论述：
　　第一部分 IL-24在正常妊娠母胎界面及在妊娠期高血压疾病的表达
　　目的:1、通过检测IL-24(interleukin24)在正常早孕、正常足月妊娠胎盘及蜕膜中的定位及表达,探讨IL-24与正常妊娠滋养细胞浸润的关系。
　　2、检测IL-24在正常足月妊娠以及子痫前期胎盘中的表达差异,探讨IL-24在妊娠期高血压疾病中的作用。
　　方法:1、分别采用免疫组织化学染色法、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测18例正常早期妊娠绒毛以及24例足月妊娠胎盘、蜕膜中IL-24蛋白定位、含量及mRNA的表达水平。
　　2、采用RT-PCR及免疫印迹法(Western blot)分别检测24例正常足月妊娠以及47例子痫前期患者(其中轻度子痫前期22例,重度子痫前期25例)的胎盘组织中IL-24的mRNA及蛋白表达水平。
　　结果:1、IL-24在正常早孕及足月妊娠绒毛及蜕膜组织均有表达,主要定位于细胞滋养细胞及合体滋养细胞的胞膜和胞浆;在蜕膜上皮组织的胞浆、胞膜均呈阳性表达;此外在具有侵袭力的滋养细胞柱(CC)、绒毛间质及血管中,亦呈阳性表达。IL-24在正常早孕妊娠胎盘及蜕膜组织中的蛋白表达水平低于正常足月妊娠,其差异有统计学意义(P<0.05);
　　2、IL-24 mRNA的表达情况:
　　(1)正常早孕绒毛中IL-24 mRNA的△△Ct值高于足月妊娠胎盘,差异具有统计学意义(P<0.05);正常早孕蜕膜中IL-24mRNA的△△Ct值高于足月妊娠蜕膜,差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　(2)与正常足月胎盘相比,子痫前期胎盘IL-24 mRNA的△△Ct值降低(P<0.05),其中以重度子痫前期组最低(P<0.01)。
　　3、IL-24蛋白表达情况:
　　(1)免疫组化结果显示,正常早孕绒毛中IL-24的光密度值低于足月妊娠胎盘,差异具有统计学意义(P<0.05);正常早孕蜕膜中IL-24的光密度值低于足月妊娠蜕膜,差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　(2)免疫印迹结果显示,与正常足月胎盘相比,子痫前期胎盘IL-24蛋白吸光度比值升高(P<0.05),其中以重度子痫前期组最高(P<0.01)。
　　结论:1、正常妊娠中,IL-24在早孕、足月胎盘及蜕膜中均有表达,且随着孕周的增长而增加,足月妊娠胎盘及蜕膜IL-24的蛋白及mRNA表达水平明显高于早孕,说明孕期滋养细胞是IL-24的重要来源之一,可能参与了妊娠期滋养细胞侵蚀的调控。
　　2、与正常足月妊娠比较,子痫前期胎盘组织中IL-24的mRNA及蛋白表达均明显增高,重度子痫前期中表达最高,提示IL-24可能参与了子痫前期胎盘的浅侵蚀,在子痫前期发病中起着重要作用。
　　第二部分 重组IL-24蛋白对绒毛外滋养细胞侵袭力的研究
　　目的:研究人重组蛋白IL-24(recombinant IL-24, rhIL-24)对绒毛外滋养细胞株TEV-1侵袭力的影响,进一步探讨IL-24与胎盘“浅着床”的关系。
　　方法:1、噻唑兰(Methl thiazolyl tetrazolium, MTT)比色法测不同浓度rhIL-24对TEV-1细胞增殖的影响。
　　2、Matrigel侵袭实验检测rhIL-24对TEV-1细胞侵袭力的影响。
　　3、明胶酶谱分析rhIL-24对TEV-1细胞的MMP-2活性的影响。
　　4、Western Blot检测rhIL-24对TEV-1细胞的MMP-2及pFAK蛋白表达影响。
　　结果:1、不同浓度rhIL-24对TEV-1细胞增殖无影响。
　　2、与对照组相比,当rhIL-24浓度≥50ng/ml时,穿过Matrigel基质膜的TEV-1细胞数明显减少(P<0.05),且与rhIL-24呈浓度依赖性。
　　3、与对照组相比,经rhIL-24处理的TEV-1细胞,在rhIL-24≥50 ng/ml时, MMP-2酶活性明显降低(P<0.05)。
　　4、与对照组相比,经rhIL-24处理的TEV-1细胞,当rhIL-24≥50 ng/ml时, MMP-2及pFAK的蛋白表达含量逐渐降低(P<0.05),而且表现出一定的浓度效应。
　　结论:1、rhIL-24可以导致绒毛外滋养细胞通过减少FAK磷酸化水平,使得MMP-2活性降低从而抑制其侵袭能力,造成滋养细胞侵袭不良、胎盘浅着床, IL-24可能是调节早孕滋养细胞侵袭力的重要因子。
　　2、rhIL-24对TEV-1细胞增殖无影响。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

·第一部分· IL-24在正常妊娠母胎界面及在子痫前期胎盘中的表达

分题一 IL-24基因在正常妊娠母胎界面的表达

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

分 题 二 IL-24在子痫前期胎盘中的表达

前言

材料和方法

结果

讨论

参考文献

·第二部分·重组IL-24蛋白对绒毛外滋养细胞侵蚀行为的影响

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

小结

·综述一·

·综述二·

附录一 缩略词及中英对照

附录 研究生期间发表的论文情况

致谢