绒毛外滋养细胞在妊娠子宫螺旋动脉重塑过程中的作用机制研究

摘要

第一部分子痫前期胎盘滋养细胞中MMP-9及FasL表达的研究目的:探讨MMP-9和FasL在子痫前期发病机制中的作用及两者间的关联。
　　 方法:
　　 采用免疫组织化学法检测 48例子痫前期孕妇（重度子痫前24例，轻度子痫前期24例）及24例正常晚期妊娠孕妇胎盘中MMP-9和FasL的表达定位及强度。
　　 结果:
　　 MMP-9主要表达于胎盘合体滋养细胞细胞质和细胞膜内，FasL主要表达于胎盘合体滋养细胞细胞质和细胞膜内。轻、重度子痫前期组MMP-9表达水平明显低于正常晚孕组（P＜0.05）。轻、重度子痫前期组FasL表达水平明显高于正常晚孕组（P＜0.05）。胎盘组织中MMP-9与FasL表达水平呈负相关（r=﹣0.700，P＜0.05）。
　　 结论;
　　 1、子痫前期胎盘滋养细胞中MMP-9与FasL表达异常，使胎盘形成时滋养细胞入侵减少及血管重塑障碍，可能与子痫前期的发病机制有关。
　　 2、子痫前期胎盘滋养细胞中MMP-9与FasL的表达水平呈负相关，可能滋养细胞的侵入与其致内皮细胞凋亡作用之间存在关联，共同参与子痫前期的发生。
　　 第二部分绒毛外滋养细胞中MMP-9表达对FasL分泌的作用和机制的研究目的:通过脂质体转染MMP-9siRNA，探讨绒毛外滋养细胞株TEV-1中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）对可溶性Fas配体（sFasL）表达的调控。
　　 方法:
　　 1、化学合成MMP-9siRNA，通过脂质体转染绒毛外滋养细胞株TEV-1。2、ReAlTime RT-PCR、ELISA检测MMP-9siRNA转染效率，ELISA检测细胞内、外FasL蛋白表达的变化。3、给予外源性MMP-9，ELISA检测细胞内、外FasL蛋白表达的变化。
　　 结果:
　　 1、转染后，MMP-9 siRNA组的MMP-9 mRNA表达量与对照组相比显著降低，（P<0.05）；MMP-9 siRNA组的FasL mRNA表达量与对照组相比差异无显著性意义（P>0.05）。2、转染后，MMP-9 siRNA组的MMP-9蛋白分泌表达与对照组中的表达量相比明显降低，（P<0.05）；MMP-9 siRNA组细胞内的MMP-9蛋白表达与对照组中的表达量相比明显降低（P<0.05）。转染后，MMP-9 siRNA组的FasL蛋白分泌表达与对照组中的表达量相比明显降低，（P<0.05）；而MMP-9 siRNA组细胞内的FasL蛋白表达与对照组中的表达量相比明显增多，（P<0.05）。3、外源性MMP-9蛋白作用后，MMP-9 siRNA组及对照组中细胞外分泌的FasL蛋白表达均较作用前明显增多（P<0.05）；而MMP-9 siRNA组及对照组中细胞内的FasL蛋白表达均较作用前明显减少（P<0.05）。
　　 结论:
　　 1、化学合成的MMP-9 siRNA能有效、特异性沉默TEV-1细胞株中的MMP-9基因。2、TEV-1细胞中MMP-9蛋白分泌表达影响细胞内、外FasL蛋白表达。3、外源性MMP-9蛋白也影响TEV-1细胞内、外FasL蛋白表达。
　　
　　 第三部分 MMP-9在绒毛外滋养细胞致内皮细胞凋亡中的作用和机制的研究目的:通过脂质体介导转染MMP-9 siRNA，探讨绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达对血管内皮细胞凋亡的影响。
　　 方法:
　　 1、在transwell上室培养TEV-1细胞株，并以脂质体介导转染MMP-9 siRNA及其对照至TEV-1。2、在transwell下室培养EVC-304细胞株，使TEV-1和EVC-304非接触性共培养。3、共培养后收集下室细胞及上清液，流式细胞仪检测EVC-304细胞的凋亡率。4、单独培养EVC-304，给予外源性MMP-9，流式细胞仪检测不同时间段EVC-304的凋亡率。
　　 结果:
　　 1、共培养体系中，MMP-9 siRNA组的滋养细胞所致内皮细胞凋亡率比对照组有明显降低（P<0.05）；在MMP-9 siRNA+MMP-9组，内皮细胞凋亡率较MMP-9 siRNA组明显增多（P<0.05）；对于对照+MMP-9组，内皮细胞凋亡率较对照组明显增多（P<0.05）。2、MMP-9直接单独作用于内皮细胞后，不同时间段的内皮细胞凋亡率无显著性差异（P<0.05）。
　　 结论:
　　 1、绒毛外滋养细胞分泌MMP-9的改变导致其诱导内皮细胞凋亡的改变。2、滋养细胞分泌MMP-9致内皮细胞凋亡率改变，是通过MMP-9对滋养细胞分泌FasL蛋白的调控实现的。

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文摘

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前言

第一部分 子痫前期胎盘滋养细胞中MMP-9及FasL表达的研究

第二部分 绒毛外滋养细胞中MMP-9表达对FasL分泌的作用和机制的研究

第三部分 MMP-9在绒毛外滋养细胞致内皮细胞凋亡中的作用和机制的研究

综述一 滋养细胞侵入行为调控机制研究

综述二 滋养细胞分化在子痫前期病因研究中的新进展

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