白花丹素对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制

摘要

第一部分
　　 目的：研究白花丹素对膀胱癌的生长抑制和诱导细胞凋亡的作用。方法：用1～20umol/L白花丹素干预膀胱癌细胞24-72小时后，用MTT法检测药物对细胞生长的抑制率。用克隆形成实验来检查细胞增殖能力。用AO/EB染色、Hoechst33258染色、Annexin V-FITC/PI双标FCM法检测细胞凋亡。结果：白花丹素以时间和剂量依赖方式抑制T24细胞的增殖。在给与1～20umol/L白花丹素干预细胞24后，细胞增殖率下降了 1.7％-88.1％。在给与1-3umol/L白花丹素处理后，细胞克隆形成率明显下降。2.5～10umol/L白花丹素干预细胞24后细胞凋亡率为11.2％-46.2％，部分细胞呈现典型的凋亡形态学改变。结论：白花丹素能通过抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡对膀胱癌T24的生长发挥明显的抑制的作用。本研究为进一步研究白花丹素抗癌机制奠定了基础。
　　 目的：研究白花丹素对膀胱癌T24细胞侵袭和迁移能力的影响及其与Twist和MMP-9表达之间的关系。方法：通过划痕试验和Transwell小室实验检测白花丹素对T24细胞迁移和侵袭能力的影响。通过RT-PCR方法检测白花丹素对T24细胞NF-κB, Twsit和 MMP-9 mRNA表达水平的影响，Western blot方法检测白花丹素对T24细胞NF-κB, Twsit和 MMP-9蛋白表达水平的影响。用NF-κB激活－核转运检测试剂盒检测白花丹素干预后T24细胞NF-κB核转位的影响。结果：1-5uM白花丹素明显的抑制了T24细胞的迁移和侵袭能力（P＜0.05)。1-10uM白花丹素抑制NF-κB, Twsit和 MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平。20uM白花丹素明显的降低了T24细胞核内NF-κB的蛋白水平。结论：白花丹素明显的抑制了T24细胞迁移和侵袭能力，同时抑制了NF-κB, Twsit和 MMP-9 mRNA和蛋白的表达水平。
　　 第二部分
　　 目的：研究异甘草酸镁（MgIG）对酒精所致小鼠睾丸氧化损伤的预防保护作用。方法：64只成年雄性昆明小鼠随机分成正常对照组、模型对照组、MgIG小剂量治疗组、MgIG大剂量治疗组。正常对照组每天予以0.4ml生理盐水灌胃；其余三组予以56％白酒连续灌胃18d（2个生精周期），剂量为16ml/kg。正常对照组和模型对照组在灌胃前45min予以0.75ml生理盐水腹腔注射；MgIG小剂量治疗组和MgIG大剂量治疗组灌胃前预防性给与异甘草酸镁腹腔注射（剂量分别为15mg/kg.d，45mg/kg.d）。干预9天和18天后分别处死小鼠，并作睾丸组织病理切片，HE染色及TUNEL染色，观察睾丸组织变化及睾丸细胞凋亡情况；检查各组小鼠精子数目和活动率改变；检测各组小鼠睾丸组织SOD、MDA、GSH-PX的含量。结果：异甘草酸镁有效的保护了酒精诱导的生精上皮的紊乱，支持细胞和精子细胞的退化和凋亡。异甘草酸镁干预组小鼠的精子计数及精子活动率明显的比模型对照组要高，但是比正常对照组要低。异甘草酸镁能够降低睾丸组织MDA，增加SOD和GSH-PX的含量，说明异甘草酸镁有抗酒精诱导的氧化损伤的作用。结论：大量饮酒即可引起小鼠睾丸氧化损伤，异甘草酸镁可以作为一种预防性的抗氧化剂减轻这种氧化损伤。
　　 目的：研究体外补充异甘草酸镁对过氧化氢(H2O2)诱导的正常男性精子氧化损伤的干预作用。方法：收集正常生育男性的精液标本，精子PBS洗涤离心后用RPMI-1640培养基制作精子悬液, 用加入不同浓度的异甘草酸镁或者600uM维生素C 37℃孵育30min后，再用200uM H2O2处理各组精子悬液，37℃孵育90min后分析各组精子悬液的精子活率、精子凋亡率和精子DNA完整性。结果：20ug/ml～0.5mg/ml的异甘草酸镁和600uM维生素C能明显的减轻200uM H2O2诱导的精子活率下降、凋亡率增加和DNA完整性的破坏(P<0.05)，而2.5mg/ml的异甘草酸镁对此没有明显的保护作用(P>0.05)。各组药物的保护效果为0.1mg/ml异甘草酸镁＞0.5mg/ml异甘草酸镁＞600uM维生素C＞20ug/ml异甘草酸镁。结论：体外补充0.1mg/ml异甘草酸镁能明显的保护H2O2诱导的精子氧化损伤。

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白花丹素对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响及其作用机制