促红细胞生成素对神经血管单元缺血缺氧损伤后的血管新生和神经保护作用研究

摘要

本研究分为两部分。
　　 第一部分：
　　 目的：探讨重组人促红细胞生成素（rH-EPO）对缺血缺氧损伤内皮细胞的血管新生作用及其可能机制。
　　 方法：氧糖剥夺（OGD）损伤内皮细胞株EA.hy 926，复氧复糖同时添加rH-EPO；采用MTT还原法、Transwell小室迁移实验及Matrigel小管形成实验评价内皮细胞血管新生能力；ELISA法检测培养上清液血管内皮生长因子（VEGF）含量；Real-time PCR法分析内皮型一氧化氮合酶（eNOS）mRNA变化；Western Blot法和细胞免疫荧光法分析eNOS蛋白变化。
　　 结果：OGD诱导EA.hy 926细胞受损，降低其增殖、迁移和管样结构形成能力，且VEGF含量减少，eNOS基因及其蛋白表达均下降；rH-EPO干预后，受损细胞的增殖、迁移和管样结构形成能力提高，VEGF含量、eNOS基因及其蛋白表达均增加（均P<0.05）。
　　 结论：rH-EPO可促进受损内皮细胞血管新生，VEGF和eNOS可能参与rH-EPO诱导的血管新生过程。
　　
　　 第二部分：重组人促红细胞生成素对体外神经血管单元缺血缺氧损伤的保护作用研究
　　 目的：探讨重组人促红细胞生成素(rH-EPO)对体外神经血管单元（NVU）缺血缺氧损伤的保护作用及其可能机制。
　　 方法：用EA.hy 926、U 87、SH-SY5Y三种细胞株共培养构建体外NVU，并验证其与在体单元在结构与功能上的相似性。氧糖剥夺法（OGD）制作NVU缺血缺氧损伤模型，观察复氧复糖同时行rH-EPO (1 U/ml和5U/ml)干预对受损NVU不同细胞成分的影响：光化学法测定EA.hy 926和SH-SY5Y胞浆内氧化（MDA）与抗氧化（SOD）指标变化；AnnexinⅤ-FITC/PI双染行流式细胞仪检测EA.hy 926和SH-SY5Y细胞凋亡率；逆转录PCR法分析SH-SY5Y胞浆内Caspase-3 mRNA表达变化；细胞免疫荧光法分析SH-SY5Y胞浆中诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白表达变化。
　　 结果：三种细胞共培养7d后，内皮细胞阳性表达血脑屏障（BBB）特异性酶，且跨内皮细胞阻抗达峰，而通透性最低。OGD使EA.hy 926和SH-SY5Y两种细胞凋亡率均明显上升，MDA含量增多、SOD活性降低，SH-SY5Y胞浆内Caspase-3 mRNA和iNOS蛋白表达均增多；但rH-EPO干预可逆转上述变化，表现为干预后的细胞凋亡明显减少、MDA含量下降、SOD活性增高(P<0.05)，且Caspase-3与iNOS表达显著下降(均P<0.05)。
　　 结论：本研究构建的体外NVU具备体内单元的基本结构及功能特征；rH-EPO后处理能改善OGD诱导的细胞损伤，其机制可能与rH-EPO减少细胞凋亡并调节凋亡基因表达、抗自由基损伤、调节iNOS表达等有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略词及中文对照

声明

第一部分 重组人促红细胞生成素体外诱导人脐静脉内皮细胞血管新生作用的实验研究

第二部分 重组人促红细胞生成素对体外神经血管单元缺血缺氧损伤的保护作用研究

综述：促红细胞生成素对神经血管单元缺血缺氧损伤的保护作用研究进展

附录

致谢信