Apocynin改善糖尿病大鼠勃起功能及其机制的研究

摘要

本文主要分四部分进行了介绍：
　　第一部分
　　Apocynin对糖尿病 ED大鼠的勃起功能的作用
　　目的：探讨 Apocynin对糖尿病 ED大鼠的勃起功能的作用。
　　方法：20只年龄45天的SD雄性大鼠随机分为3组,正常对照组大鼠7只,其他13只大鼠用于糖尿病 ED大鼠模型的构造,给予腹腔一次性注射链脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)60mg/Kg的柠檬酸钠缓冲液(50mmol/L,PH=4.5),注射72小时后,利用血糖仪检测大鼠的血糖值,随机血糖高于16.7mmol/L被认为糖尿病大鼠造模成功,所有大鼠均造模成功。8周后,随机选取7只大鼠灌胃给予 Apocynin(16mg/Kg),另外6只糖尿病大鼠及正常对照组大鼠给予生理盐水灌胃,持续4周。4周后,通过电刺激阴茎海绵体神经诱导阴茎勃起,同时记录大鼠的平均动脉压(Mean arterial blood pressure, MAP)及海绵体压力(Intracavernosal Pressure, ICP),ICP/MAP的比值即反应大鼠的勃起功能。
　　结果：糖尿病 ED大鼠的勃起功能明显的低于正常对照组(P<0.05),给予 Apocynin组糖尿病 ED大鼠勃起功能明显高于糖尿病 ED组(P<0.05)。
　　结论：Apocynin能够改善糖尿病 ED大鼠的勃起功能。
　　第二部分
　　Apocynin对糖尿病大鼠阴茎组织中NADPH氧化酶的抑制作用
　　目的：探讨 Apocynin对糖尿病大鼠阴茎组织中NADPH氧化酶的抑制作用。
　　方法：通过蛋白质印迹(Western Blot, WB)技术检测各组大鼠阴茎海绵体组织中NADPH氧化酶亚基p47phox和p67phox蛋白表达的情况。应用二氢吡啶(dihydropyridine, DHE)荧光探针定性检测大鼠阴茎海绵体组织中总的活性氧表达情况。应用硫代巴比妥酸反应物(Thiobarbituric Acid Reactive Substances, TBARS)法检测脂质过氧化物丙二醛(malondialdehyde, MDA)的表达多少来确定 ROS的多少。
　　结果：糖尿病 ED大鼠阴茎组织中p47phox和p67phox蛋白表达、ROS及MDA的表达明显的高于正常对照组(P<0.05),给予 Apocynin组糖尿病 ED大鼠阴茎组织中p47phox和p67phox蛋白表达、ROS及MDA的表达明显的低于糖尿病 ED组(P<0.05)。
　　结论：Apocynin能够通过抑制NADPH氧化酶明显的减少 ROS的产生。
　　第三部分
　　Apocynin对糖尿病大鼠阴茎组织中nNOS及eNOS表达的作用
　　目的：探讨 Apocynin对糖尿病大鼠阴茎组织中nNOS及eNOS表达的作用。
　　方法：通过实时荧光聚合酶链反应(Real-time Polymerase Chain Reaction, RT-PCR)技术,WB技术检测各组大鼠阴茎海绵体组织中nNOS及eNOS基因及蛋白表达的情况。
　　结果:糖尿病 ED大鼠阴茎组织中nNOS及eNOS的基因表达及蛋白表达明显的低于正常对照组(P<0.05),给予 Apocynin组糖尿病 ED大鼠阴茎组织中nNOS及eNOS的基因表达及蛋白表达明显的高于糖尿病 ED组(P<0.05)。
　　结论： Apocynin能够明显改善糖尿病 ED大鼠阴茎海绵体组织中nNOS及eNOS的表达。
　　第四部分
　　Apocynin对糖尿病大鼠阴茎组织中RhoA/ ROCK途径的抑制作用
　　目的：探讨 Apocynin对糖尿病大鼠阴茎组织中RhoA/ROCK信号途径的抑制作用。
　　方法：通过 RT-PCR技术,WB技术检测各组大鼠阴茎海绵体组织中RhoA、ROCK1和ROCK2基因的表达情况,以及磷酸化肌球蛋白轻链磷酸酶(Phosphonation-myosin light chain phosphatase, p-MYPT1),细胞膜 RhoA,细胞质 RhoA,ROCK1和ROCK2蛋白的表达情况。
　　结果：糖尿病 ED大鼠阴茎组织中ROCK1的基因及蛋白、p-MYPT1蛋白的表达明显的高于正常对照组(P<0.05),RhoA、ROCK2与正常对照组及糖尿病大鼠给予Apocynin组没有明显的差别。给予 Apocynin组糖尿病 ED大鼠阴茎组织中ROCK1的基因及蛋白表达、p-MYPT1蛋白的表达明显的低于糖尿病 ED组(P<0.05)。
　　结论：Apocynin可以抑制糖尿病 ED大鼠阴茎组织中RhoA/ROCK信号途径。

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中英文缩略词表

研究背景

中文摘要

英文摘要

正文

前 言

参考文献

第一部分Apocynin对糖尿病ED大鼠的勃起功能的改善作用

材料与方法

结 果

第二部分Apocynin对糖尿病大鼠阴茎组织中 NADPH氧化酶的抑制作用

材料和方法

结 果

第三部分Apocynin对糖尿病大鼠阴茎组织中nNOS及eNOS表达的作用

材料与方法

结 果

第四部分Apocynin对糖尿病大鼠阴茎组织中RhoA/Rho激酶途径的抑制作用

材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

综述一

1.代谢综合征的相关因素

2.代谢综合征及相关因素与ED

3. 代谢综合征合并ED的治疗

4.结语

参考文献

综述二

危险因素与血管性疾病

血管疾病NADPH氧化酶各亚型作用

NADPH氧化酶的作用机制

血管壁各细胞中NADPH氧化酶的分布

NADPH氧化酶在阴茎组织中的表达

新的NADPH氧化酶抑制剂的开发

参考文献

综述三

线粒体的功能及线粒体ROS的产生

NADPH氧化酶

NADPH氧化酶刺激线粒体ROS的产生

线粒体ROS激活NADPH氧化酶

线粒体和NADPH氧化酶之间的相互作用

NADPH氧化酶及线粒体在糖尿病中的作用

NADPH氧化酶及线粒体动脉粥样硬化的作用

展望

参考文献

附 录

致谢