络合铜宫内节育器对大鼠的避孕效果及其相关因子表达的研究

摘要

第一部分络合铜宫内节育器对大鼠的抗生育作用及生育力恢复实验
　　目的:研究络合铜生物高分子复合材料宫内节育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD,简称络合铜IUD)对大鼠的避孕效果,以及取器后对生育力的可逆性恢复能力。
　　方法:160只性成熟SPF级雌性SD大鼠,随机分为6组:假手术组(SO group,n=20)、金属裸铜组(Cu group,n=30)、生物基体材料组(SiO2/PVA group,n=30)、络合铜低剂量组(CuCl2/SiO2/PVA group I,Cu2+释放率为5-10ug/220mm2/d,n=30)、络合铜高剂量组(CuCl2/SiO2/PVA group II,Cu2+释放率为10-20ug/220mm2/d,n=30)和空白对照组(NC group,n=20)。适应性喂养一周后置器,置器30d后,每组取20只(假手术组与空白对照组每组取10只)雌性大鼠与有生育力的雄鼠交配,于孕14d处死雌鼠,观察受孕和胚胎发育情况。另每组剩余的10只大鼠取器,观察生育力恢复情况。
　　结果:置络合铜宫内节育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)大鼠的抗生育率均为100％,且低剂量组(CuCl2/SiO2/PVA group I)的生育力恢复率为100％,与金属裸铜组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
　　结论:低剂量络合铜生物高分子复合材料宫内节育器(CuCl2/SiO2/PVA I IUD)具有与传统金属裸铜IUD同样良好的避孕效果和生育力的可逆性恢复能力。
　　第二部分络合铜宫内节育器对大鼠血清和宫腔液铜离子的释放行为研究
　　目的:通过检测不同材料宫内节育器在置器的不同时间点大鼠血清和宫腔液铜离子的浓度,以初步评估络合铜生物高分子复合材料宫内节育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)的安全性。
　　方法:60只性成熟SPF级雌性SD大鼠,10-12周龄,随机分为6组:假手术组(SO group,n=10)、金属裸铜组(Cu group,n=10)、生物基体材料组(SiO2/PVA group,n=10)、络合铜低剂量组(CuCl2/SiO2/PVA group I,n=10)、络合铜高剂量组(CuCl2/SiO2/PVA group II,n=10)组和空白对照组(NC group,n=10)。于置器后60d内的不同时间点(0d、1d、3d、5d、7d、30d、60d)分别取大鼠血清和局部宫腔液,通过原子吸收火焰法测定大鼠血清和局部宫腔液的Cu2+浓度。
　　结果:不同时间点各组大鼠的血清Cu2+浓度差异均无统计学意义(P>0.05)。在置器的第1周里,各组置器大鼠(除生物基体材料组以外)的宫腔液Cu2+浓度明显升高,且金属裸铜组升高的速率显著高于络合铜组;络合铜组大鼠宫腔液Cu2+浓度在第5d即达到峰值,而裸铜组在第5d后仍有上升趋势;置器后的30d到60d,络合铜低剂量组的宫腔液Cu2+浓度显著低于裸铜组和络合铜高剂量组;置络合铜IUD的大鼠宫腔液Cu2+浓度与裸铜组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　结论:络合铜生物高分子复合材料宫内节育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)避免了传统金属裸铜IUD在置入初期的Cu2+暴释现象,且在不同时间点全身血清浓度均维持在较低且稳定的范围,提示其在发挥Cu2+局部避孕作用的基础上不会出现体内Cu2+蓄积。
　　第三部分络合铜宫内节育器对大鼠子宫内膜的形态学影响
　　目的:研究络合铜生物高分子复合材料宫内节育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)对大鼠子宫内膜及重要脏器的形态学影响,以初步探讨络合铜宫内节育器的安全性。
　　方法:60只性成熟SPF级雌性SD大鼠,10-12周龄,随机分为5组:金属裸铜组(Cu group)、生物基体材料组(SiO2/PVA group)、络合铜低剂量组(CuCl2/SiO2/PVA group I)、络合铜高剂量组(CuCl2/SiO2/PVA group II)和空白对照组(NC group)。在大鼠左侧子宫近阴道段作一切口,朝卵巢方向置入不同材料,分别于置器30d和60d后取置器侧子宫内膜、卵巢及心、肝、脾、肺、肾、脑组织,采用HE染色和透射电镜技术观察其组织病理和超微病理的形态学改变。
　　结果:置器的大鼠子宫内膜均可见上皮细胞的形态和结构发生改变。子宫内膜组织病理检查所示络合铜低剂量组30d和60d炎症反应比裸铜组轻,且未见全身其他重要脏器病理学异常改变。超微病理检查显示裸铜组30d后的子宫内膜出现微绒毛稀少或消失,线粒体肿胀,内质网扩张,腺上皮细胞内初级溶酶体增多及大量空泡形成等改变,且在置器60d后改变更为明显;而络合铜低剂量组大鼠子宫内膜上皮细胞的改变较轻微,且两个时间点差异不明显。
　　结论:与裸铜宫内节育器相比,置低剂量络合铜生物高分子复合材料宫内节育器(CuCl2/SiO2/PVA I IUD)大鼠子宫内膜组织病理和超微病理的形态学改变较小,证明其对子宫内膜的刺激作用较轻微,因而可能减少置器初期的不良反应。
　　第四部分络合铜宫内节育器对大鼠子宫内膜相关因子表达的研究
　　目的:通过检测各组大鼠子宫内膜中与出血、疼痛等副作用相关的因子,以初步探讨新材料络合铜生物高分子复合材料宫内节育器(CuCl2/SiO2/PVA IUD)对大鼠子宫内膜内环境的影响和减少置器后副反应的可能机制。
　　方法:40只性成熟SPF级雌性SD大鼠,10-12周龄,随机分为4组:金属裸铜组(Cu group)、低剂量络合铜组(CuCl2/SiO2/PVA group I)、高剂量络合铜组(CuCl2/SiO2/PVA group II)和空白对照组(NC group)。置器60d后,对子宫内膜出血、疼痛等副作用的相关因子进行检测:分别采用免疫组化S-P法、蛋白印迹法(Western blotting)和实时荧光定量PCR技术(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测各组大鼠子宫内膜组织中P物质(SP)及其受体(SPR)、血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flk1)、基质金属蛋白酶9(MMP9)及其抑制因子(TIMP-1)的相关蛋白和mRNA的表达水平。
　　结果:①SP和SPR主要表达于子宫内膜血管壁的周围及部分内膜间质细胞胞浆,MMP9和TIMP-1广泛表达于子宫内膜腺上皮、基质及血管内皮,VEGF及Flk1在大鼠子宫内膜腺上皮及基质内均有表达;②与金属裸铜组相比,络合铜组尤其是低剂量组的相关因子(SP、SPR、MMP9、VEGF和Flk1)的蛋白和mRNA表达水平较低,TIMP-1则较高,差异具有统计学意义(P<0.05)。
　　结论:较传统金属裸铜IUD而言,络合铜生物高分子复合材料IUD对置器后子宫内膜内环境释放的相关因子影响较小,因而推测其可能减轻含铜IUD置器初期子宫异常出血、疼痛等不良反应。

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中文摘要

英文摘要

前 言

参考文献

第一部分 络合铜宫内节育器对大鼠的抗生育作用及生育力恢复实验

引 言

1.1材料与方法

1.2 实验方法

1.3 结 果

1.4 讨论

参考文献

第二部分 络合铜宫内节育器对大鼠血清及宫腔液铜离子释放行为的研究

引 言

2.1材料与方法

2.2 实验方法

2.3 结果

2.4 讨论

参考文献

第三部分 络合铜宫内节育器对大鼠子宫内膜的形态学影响

3.1 材料与方法

3.2 实验方法

3.3 结果

3.4 讨论

参考文献

第四部分 络合铜宫内节育器对大鼠子宫内膜相关因子表达的研究

引 言

4.1材料与方法

4.2 实验方法

3. 结果

4.4 讨论

致谢

总 结

主要结论

本文创新之处

研究与展望

综 述

一、 惰性IUD

二、 活性IUD

三、新材料IUD的研究现状

参考文献

附 录

致谢