高血压患者外周血CD4+T细胞Kv1.3钾通道的变化

摘要

目的:探讨高血压患者外周血CD4+T淋巴细胞上的电压门控性钾通道(Kv1.3)的变化,以及血管紧张素II(ANGII)如何作用于淋巴细胞参与高血压的炎症反应过程。
　　方法:收集24例高血压患者和24例健康志愿者外周血,密度梯度离心法分离出外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠法分选出CD4+T淋巴细胞,分别给予0、2nmol/LANGII干预后放入培养箱培养48小时。培养48h后的CD4+T淋巴细胞采用全细胞膜片钳技术分别记录淋巴细胞膜电容和Kv1.3钾通道电流,并用实时定量PCR法(RT-PCR)检测CD4+T淋巴细胞上Kv1.3钾通道和血管紧张素受体(AT1R)蛋白mRNA的表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组CD4+T淋巴细胞培养上清IFN-γ浓度。
　　结果:(1)给予ANGII干预前,高血压患者CD4+T淋巴细胞膜电容明显高于健康人,高血压患者CD4+T淋巴细胞Kv1.3钾通道峰值电流也明显高于健康人,而校正膜电容后,高血压患者CD4+T淋巴细胞电流密度与健康人比较无明显差异。
　　(2)给予ANGII干预后,CD4+T淋巴细胞膜电容在高血压患者和健康人给药前后均无变化;给药后CD4+T细胞Kv1.3钾通道峰值电流在高血压患者增高不明显,而给药后CD4+T细胞Kv1.3钾通道峰值电流在健康人明显增高,且校正膜电容后其电流密度也明显增高。
　　(3)给予ANGII干预前,高血压患者CD4+T细胞Kv1.3钾通道mRNA表达与健康人比较无差异;给予ANGII干预后,高血压患者CD4+T细胞Kv1.3钾通道mRNA表达增加不明显,而健康人CD4+T细胞Kv1.3钾通道mRNA表达明显增加。
　　(4)高血压患者和健康人外周血CD4+T淋巴细胞上可检测到血管紧张素受体(AT1R)mRNA的表达,且高血压患者CD4+T细胞AT1RmRNA表达明显高于健康人,给予ANGII干预后高血压患者和健康人CD4+T细胞AT1RmRNA表达均无明显变化。
　　(5)给予ANGII干预前,高血压患者和健康人CD4+T细胞培养上清IFN-γ浓度无差异;给予ANGII干预后,高血压患者CD4+T细胞培养上清IFN-γ浓度较健康人增加更明显。
　　结论:高血压患者外周血CD4+T淋巴细胞Kv1.3钾通道表达增多,ANGII能增加CD4+T淋巴细胞Kv1.3钾通道表达,且能促进细胞因子IFN-γ的分泌。ANGII促进CD4+T细胞活化和细胞因子分泌的效应可能由AT1R介导。本研究提示高血压患者体内存在淋巴细胞激活的炎症状态,且ANGII可能通过直接作用于AT1R刺激淋巴细胞分泌细胞因子参与到高血压的进展及其靶器官损害,Kv1.3钾通道的开放可能是ANGII诱导淋巴细胞活化的机制之一。

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前言

材料与方法

1. 材料

1.1标本采集

1.2主要试剂:

1.3 主要实验器材：

2．方法

2.1 密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞：

2.2 磁珠分选CD4+T淋巴细胞：

2.3 CD4+T细胞计数：

2.4 实验分组及CD4+T细胞的培养：

2.5 膜片钳记录CD4+T细胞的Kv1.3钾通道电流：

2.6 RT-PCR检测ANGII干预组和对照组CD4+T细胞Kv1.3钾通道和血管紧张素II受体1型（AT1R）的表达：

2.7 酶联免疫吸附试验（ELISA）检测CD4+T细胞培养上清IFN-γ浓度。

2.8 统计学分析

结果

讨论

参考文献

综述

致谢