Kv1.3钾通道特异性阻断剂对动脉粥样硬化大鼠CD4+T淋巴细胞的影响和意义

摘要

目的：检测Kv1.3钾通道阻滞剂ShK(L5)对动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)大鼠CD4+T淋巴细胞的Kv1.3钾通道电流密度和细胞内钙离子浓度变化的影响，探讨Kv1.3阻断剂在抗动脉粥样硬化过程中的作用。
　　 方法：Wistar雄性大鼠24只，随机分为正常对照组、高脂饲料诱导动脉粥样硬化组和阻断剂治疗组。其中阻断剂组在高脂饲料喂养8周后给予皮下注射ShK(L5)阻断剂8周。喂养8周和16周时监测各组大鼠体重和血清中血脂水平的变化。喂养16周后测量大鼠体重，麻醉后取脾脏，心脏取血后处死，留取主动脉全段通过HE染色观察动脉斑块形成确定模型成功。最后，用免疫磁珠法分离出大鼠脾淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞，采用全细胞膜片钳技术记录三组单个细胞上Kv1.3钾通道电流密度。同时将CD4+T淋巴细胞经培养48小时后进行细胞内钙离子染色，运用激光共聚焦显微镜检测各组细胞内钙离子荧光强度。
　　 结果：病理结果示AS大鼠符合动脉粥样硬化病理特点。血脂检测结果动脉粥样硬化组TG、TC、LDL高于对照组(p＜0.05)，AS组HDL与对照组比较无统计学意义；阻断剂组较正常对照组TC和LDL升高明显(p＜0.05)，但TG和HDL两组比较无统计学意义；阻断剂组较AS组血脂无明显改变。Kv1.3钾通道阻滞剂Shk(L5)可以显著减少CD4+T淋巴细胞Kv1.3通道开放的数目，并引起CD4+T细胞内钙离子浓度的降低。激光共聚焦显微镜结果示AS组CD4+T淋巴细胞内钙离子平均荧光强度增强，与对照组比较（204.70±20.05vs98.28±29.10，p＜0.05）：阻断剂组与AS组比较钙离于荧光强度减弱（26.2±10.05vs204.70±20.05，p＜0.05），阻断剂组亦显著低于对照组(26.2±10.05vs98.28±29.10，p＜0.05)。阻断剂组大鼠的CD4+T淋巴细胞和对照组大鼠的CD4+T淋巴细胞的电流密度明显低于AS组CD4+T淋巴细胞电流密度([(197.65±41.59)pA/pF]vs[(378.23±56.85)pA/pF],p＜0.05;[(302.98±42.14)pA/pF]vs[（378.23±56.85）pA/pF]，p＜0.05）；阻断剂组CD4+T淋巴细胞的电流密度与对照组比较差异无统计学意义。
　　 结论：Shk(L5)是钾离子通道Kv1.3的特异性阻断剂，应用阻断剂治疗AS大鼠，可以减小Kv1.3通道电流密度，同时降低CD4+T淋巴细胞内钙离子浓度，Kv1.3是潜在的治疗动脉粥样硬化的新靶点。