AIPC细胞模型建立及LSD1在AI表型转化中的作用机制

摘要

目的：建立雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞模型,初步探讨LSD1在前列腺癌获得AI表型中的作用机制。
　　方法：LNCaP细胞在含10％活性炭/葡聚糖处理的胎牛血清的无酚红RPMI1640培养基中连续培养3个月。在此期间,动态观察细胞生长变化。CCK-8法检测LNCaP-AI与LNCaP细胞增殖情况。RT-PCR检测LNCaP-AI细胞与LNCaP细胞中基因AR、前列腺特异性抗原(prostate-specificantigen,PSA)、LSD1、p53、p21、Bax、Bcl-2转录水平差异。WesternBlot检测LNCaP-AI细胞与LNCaP细胞中的基因AR、PSA、LSD1、p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白表达水平差异。ELISA法分析LNCaP-AI细胞与LNCaP细胞分泌蛋白PSA的能力。免疫共沉淀法(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)分析LNCaP-AI细胞中LSD1与AR、p53的相互作用。
　　结果：在去雄激素诱导过程中,LNCaP细胞生长受到抑制并出现神经内分泌样状态。经过3个月,LNCaP细胞摆脱了神经内分泌样状态并恢复快速增殖。CCK-8证实LNCaP-AI细胞在去雄激素培养基中能够快速生长,而LNCaP细胞生长受到持续抑制。RT-PCR与WesternBlot表明,与LNCaP细胞相比,LNCaP-AI细胞中基因PSA表达明显下调而基因AR表达上调。ELISA显示,LNCaP-AI细胞群落在去雄激素培养基中分泌PSA总量明显高于LNCaP细胞群落。RT-PCR与WesternBlot分析表明,与LNCaP细胞相比,LNCaP-AI细胞中基因LSD1表达明显上调。Co-IP分析提示,LNCaP-AI细胞中存在LSD1与AR、p53的直接相互作用。进一步用RT-PCR与WesternBlot分析显示,与LNCaP细胞相比,LNCaP-AI细胞中基因p53、p21、Bax表达明显下调,而基因Bcl-2表达显著增加。
　　结论：对LNCaP细胞进行3个月的去雄激素诱导,获得AIPC细胞模型。雄激素非依赖性与依赖性前列腺癌中,LSD1表达存在明显差异。在去雄激素条件下,LSD1表达上调:一方面可能通过活化AR通路,促进前列腺癌细胞适应去雄激素条件;另外,可能通过抑制p53凋亡通路促进前列腺癌细胞抵抗去雄激素性凋亡而存活。LSD1可能通过正调控AR通路和负调控P53通路而在前列腺癌AI表型转化中发挥重要作用。

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引言

材料与方法

1． 实验材料

1.1 细胞株

1.2 实验主要仪器

1.3 实验主要耗材

1.4 实验主要试剂

2． 实验方法

2.1 LNCaP细胞培养

2.2 雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞模型的建立

2.3 LNCaP-AI细胞模型初步鉴定

2.3.4 Western Blot法分析LNCaP-AI与LNCaP细胞中AR、PSA、LSD1、p53、p21、Bax、Bcl-2蛋白表达差异

2.3.5 ELISA法分析LNCaP-AI与LNCaP细胞分泌PSA的差异

2.3.6 免疫共沉淀法分析LSD1与AR、p53的相互作用

2.3.7 统计学方法

结果

1. 雄激素非依赖性人前列腺癌LNCaP-AI细胞模型的建立

2. LNCaP-AI与LNCaP细胞的增殖能力比较

3. LNCaP-AI与LNCaP细胞的AR、PSA表达水平的比较

4. 去雄激素培养液中LNCaP-AI与LNCaP细胞的PSA分泌水平比较

5. LSD1在LNCaP-AI与LNCaP细胞中表达水平的比较

7. LNCaP-AI与LNCaP细胞中p53、p21、Bax、Bcl-2表达状况

讨论

结论

参考文献

综述

致谢