钙稳态失衡对钙记忆相关蛋白表达的影响机制及钙离子调节剂临床疗效的荟萃分析

摘要

钙离子是细胞内重要的第二信使,在细胞分裂增殖、受精、基因转录和表达等生理过程扮演着重要的角色,钙离子稳态失衡是很多疾病的共同病理机制之一。阿尔茨海默病患者由于老年斑、神经纤维缠结等病理产物的聚集,淀粉样前体蛋白(APP)、载脂蛋白E(ApoE)、早老素(PS)等基因突变会引起神经元钙稳态失调,影响神经元的存活和学习记忆过程。目前的解释仅限于多种病理变化引起的钙超载对神经元损伤和学习记忆形成和巩固过程的影响,具体环节和通路尚不清楚,低钙状态对学习记忆影响的机制未曾涉及。本研究根据前期工作提出:钙超载和低钙均会影响学习记忆过程,其机制可能是各种病理刺激导致的钙稳态失衡抑制了钙振荡,降低了钙-记忆相关蛋白质的磷酸化水平和合成,最终影响记忆的形成和巩固。为了佐证这一设想,本研究用NMDA受体激活剂和钙螯合剂分别处理神经元,模拟不同的钙病理,检测他们对钙振荡和钙-记忆相关蛋白质表达的影响,并选用一种在不同钙病理条件下对钙流具有双向调节作用的药物雷洛昔芬进行干预,成功的逆转了这一病理过程。为了进一步论证钙调节剂治疗AD有效性和安全性,我们选用了一种对钙流有抑制作用的NMDA受体拮抗剂美金刚和雷洛昔芬进行系统综述和Meta分析,发现它们对学习记忆均有改善作用。证明:钙稳态失衡确实是AD的重要病理机制,根据患者特点选用合适的钙调节剂是AD治疗的有效方法之一。本研究共分为三部分:
　　第一部分:钙稳态失衡对钙记忆相关蛋白表达的影响机制及雷洛昔芬的逆转效应
　　【背景/目的】钙稳态失衡是阿尔茨海默病重要的病理特征之一,其具体机制至今未明。本研究试图揭示钙稳态失衡对钙记忆相关蛋白的影响及与钙振荡的关联。
　　【方法】首先用各种浓度梯度的谷氨酸盐溶液和BAPTA-AM溶液刺激神经元来模拟细胞内钙超载和低钙状态,然后测试他们对钙振荡的影响。实验完毕,提取神经元总蛋白,用Westernblotting分析钙-记忆相关蛋白的表达情况。用MTT法测试谷氨酸和BAPTA-AM刺激后神经元的活性。
　　【结果】研究发现1~100uM的谷氨酸盐延长了钙峰持续期并且增加Cav1.2,NR1,NR2B,PSD95,CaMKII,pCREB的表达。300uM和1uM谷氨酸盐抑制钙振荡并减少PSD93和pCREB表达。雷洛昔芬增加300uM谷氨酸盐刺激后Cav1.2,NR2B,PKC,CREB的表达。1uM~50uMBAPTA-AM呈浓度依赖性的抑制钙振荡,减少NR1,PSD95,PSD93,CaMKII,pCaMKII,pCREB的表达。雷洛昔芬增加20uMBAPTA-AM刺激后PSD95,PSD93,pCaMKII,CREB的表达。高浓度的谷氨酸和BAPTA-AM降低神经元的活性,但是可以被适当浓度的雷洛昔芬所逆转。
　　【结论】钙稳态失调可以通过抑制钙振荡减少钙-记忆相关蛋白的表达,这可能是AD认知退变的机制之一。雷洛昔芬能够逆转钙振荡降低所致的钙-记忆相关蛋白表达下调。
　　第二部分:美金刚治疗阿尔茨海默病的有效性和安全性系统综述和Meta分析
　　【背景/目的】美金刚已经被美国食品药品监督管理局批准为治疗中重度阿尔茨海默病的治疗药物,然而,最近有几项临床研究却认为它对阿尔茨海默病并无明显的治疗益处,且存在一定的副作用。本研究将收集所有可以得到的临床研究以更新美金刚治疗阿尔茨海默病的结论。
　　【方法】我们检索了九个数据库,时间截止2012年9月25日。用ReviewManagerversion5.1合并同样的研究项目,检测异质性和敏感性,用森林图表示合并效应。CochraneHandbook(version5.0.1)用于评价纳入研究的总体偏倚。Egger’s检验和漏斗图用于评价报告偏倚。同时,我们也评价了美金刚治疗AD的有效性和安全性。
　　【结果】一共检索到889篇文章,12篇入选。合并分析发现美金刚对阿尔茨海默病认知和临床医师总体印象有利;对精神状态,日常生活行动能力,没有明显的益处。对脑容量和代谢的结果存在争议。美金刚对失访率,不良事件导致的失访没有明显的影响,但对肥胖,思维混沌感,高血压,神经系统障碍和跌倒有更高的风险。漏斗图显示报告偏倚存在,但Egger’s检验发现偏倚不显著。
　　【结论】美金刚对AD患者认知和临床医师总体印象有益,但是对思维混沌,肥胖,高血压,神经系统障碍和跌倒存在较高的诱发风险。
　　第三部分:雷洛昔芬对更年期妇女认知和生活质量的影响:一个临床随机对照研究的系统综述
　　【背景/目的】雷洛昔芬在临床上用作绝经后妇女骨质疏松的治疗和乳腺癌的预防。然而,他对老年女性认知和更年期症状的影响存在争议。本研究将用循证医学的方法尽可能收集所有的相关研究得出一个综合性的结论,给病人一些有意义的建议。
　　【方法】我们检索了13个电子数据库,阅读标题和摘要以排除明显不合要求的文章,然后根据准入标准阅读全文和参考文献。如果没有全文,我们将会写信向作者索要PDF文本。将提取的数据记录在EXCEL表格中,两个作者将会根据Jadad分数和循证医学手册评价该研究的质量。
　　【结果】我们获得了7项合格的研究,设计、评价指标和问卷有相当大的异质性。根据Jadad分数,其中有四项研究得到5分,三项研究得3分,仅仅两项研究使用了分配掩藏方法。有两项研究(n=5599)发现60mg/ml雷洛昔芬能够改善动词记忆,120mg/ml雷洛昔芬能减少轻度认知障碍的发病风险达33％,在一定程度上降低AD的发病率,其他两项研究则没有发现显著差异。有三项研究发现雷洛昔芬并不能减轻抑郁,其他研究则发现能够减轻抑郁。从现有的研究来看,没有充足的证据证明雷洛昔芬对焦虑、睡眠、性功能、血管症状是否有效,但却显著地使绝经期症状恶化。
　　【结论】雷洛昔芬可能对认知有改善作用,但对焦虑、抑郁、睡眠、性功能、血管症状没有明显的影响,而且可使绝经期症状显著地恶化。它对绝经期女性骨质疏松的治疗以及乳腺癌的预防是安全的,但是不适合血管狭窄和有血栓形成倾向的患者。

目录

封面

声明

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引言

第一部分 钙稳态失衡对钙记忆相关蛋白质表达的影响机制及雷洛昔芬的逆转效应

前言

材料和方法

1.1仪器设备

1.2抗体和试剂

1.3实验方法

1.4 统计分析

结果

2.1 谷氨酸呈浓度依赖性地调节钙振荡

2.2 BAPTA-AM呈浓度依赖性的抑制钙振荡波

2.3雷洛昔芬对300uM谷氨酸预处理神经元钙振荡抑制的逆转效果

2.4雷洛昔芬对20uM BAPTA-AM预处理钙振荡的抑制作用

2.5钙振荡失衡降低神经元活性以及雷洛昔芬的逆转效应

2.6谷氨酸呈浓度依赖性的调节钙记忆相关蛋白的表达

2.7 BAPTA-AM呈浓度依赖性地降低钙记忆相关蛋白的表达

2.8雷洛昔芬增加300uM谷氨酸预处理神经元钙记忆相关蛋白的表达

2.9雷洛昔芬呈浓度依赖性的调节20uM BAPTA-AM处理后钙记忆相关蛋白的表达

讨论

小结

参考文献

第二部分：美金刚治疗阿尔茨海默病有效性和安全性的系统综述和Meta分析

前言方法

1.1 本研究的纳入标准

1.2 结果评价方法

1.3 确定纳入研究的检索策略

1.4 数据收集和分析

1.5 纳入研究的偏倚评价

1.6 评价异质性

结果

2.1 检索结果

2.2 纳入研究的偏倚

2.3 干预效果

讨论

小结

参考文献

第三部分 雷洛昔芬对更年期妇女认知和生活质量的影响：一个临床随机对照研究的系统综述

前言

方法

1.1检索策略和研究选择

1.2 数据提取

1.3 分析

结果

2.1研究结果描述

2.2研究特征

2.3方法学质量和偏倚

2.4雷洛昔芬对认知的影响

2.5雷洛昔芬对抑郁/焦虑的影响

2.6雷洛昔芬对性功能的影响

2.7雷洛昔芬在其他方面的作用

讨论

小结

参考文献

本课题的主要创新点

综述一 钙信号与学习记忆

综述二 雷洛昔芬的神经保护机制

致谢