白细胞介素-1F7基因Thr42Ala错义突变的功能学研究

摘要

白细胞介素（Interleukin）是一类具有调节和激活免疫细胞、介导淋巴细胞的增殖活化作用，并参与炎症反应的细胞因子。白细胞介素1家族（Interleukin-1 family， IL-1F）成员大多是促炎细胞因子，人类白细胞介素-1F7（IL-1F7）作为其中为数较少的抑炎细胞因子之一，是IL-1家族中唯一的与鼠非同源基因。
　　IL-1F7基因位于2号染色体，有五种不同的剪切变体（IL-1F7a、IL-1F7b、IL-1F7c、IL-1F7d、IL-1F7e），IL-IF7b是最长的转录本，是参与炎症相关性疾病的发生的重要基因。正常情况下IL-1F7b主要在细胞质中表达，脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激可引起IL-1F7进入细胞核表达。
　　位于IL-1F7第二个外显子的单核苷酸多态性（SNP）位点rs3811047为A→G碱基变异，可导致IL-1F7第42位氨基酸编码由苏氨酸（Threonine，Thr）变为丙氨酸（Alanine，Ala）。本研究主要对该基因变异的功能进行细胞学分析，并研究Thr42Ala错义突变对IL-1F7基因功能的影响。
　　构建了IL-1F7-EGFP-C1及IL-1F7-Thr42Ala-EGFP-C1质粒，针对IL-1F7及其错义突变Thr42Ala对细胞凋亡的影响和细胞核定位两方面作了研究，结果显示：（1）IL-1F7野生型及突变型都能抑制细胞的凋亡，二者对细胞凋亡的抑制作用无明显差异。由于LPS能引起细胞凋亡，且炎症与细胞凋亡关系密切，在研究中首次发现了IL-1F7可显著抑制由LPS引起的细胞凋亡，这为研究IL-1F7的功能提供了新线索；（2）正常情况下，IL-1F7野生型及Thr42Ala错义突变主要在细胞质中表达，LPS能引起二者进入细胞核，且二者在细胞的定位无显著性差异，蛋白质结构预测也显示该突变蛋白与野生型无显著性差异，提示该突变可能是通过影响IL-1F7细胞中定位以外的其他机制参与了炎症相关性疾病的调控。
　　综上所述，本次研究对IL-1F7错义突变Thr42Ala及IL-1F7基因功能进行了分析，为深入研究该白细胞介素1家族细胞因子提供了新的思路。

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1 绪论

1. 1 白细胞介素1家族抑炎因子

1. 2 IL-1F7功能研究进展

1. 3 细胞凋亡与炎症

1. 4 研究目的与意义

2 材料与方法

2. 1 实验材料

2. 2 仪器与试剂、耗材

2. 3 实验方法

3 结果与分析

3. 1 重组IL-1F7-EGFP-C1质粒构建

3. 2 重组IL-1F7-Thr42Ala-EGFP-C1质粒构建

3. 3 IL-1F7野生型及突变型对细胞凋亡的影响

3. 4 IL-1F7野生型及突变型的细胞核定位

4 讨论

5 全文总结和展望

5. 1 主要研究结果

5. 2 特色和创新

5. 3 课题展望

致谢

参考文献

附录Ⅰ 质粒图谱

附录Ⅱ 本论文中用到的缩略语

附录3 攻读硕士学位期间发表的学术论文