尼妥珠单抗阻断非小细胞肺癌EGFR核转位的放疗增敏研究

摘要

目的：探索尼妥珠单抗联合放疗对非小细胞肺癌H292及H1975细胞的放疗增敏作用及可能的作用机制。
　　方法：体外培养人非小细胞肺癌H292及H1975细胞系，实验细胞分为四组：分别为对照组、尼妥珠单药组、放疗组、尼妥珠单药联合放疗组。MTT法检测尼妥珠单抗单药及尼妥珠单抗联合放疗对细胞增殖的影响；平板克隆形成实验检测尼妥珠单抗对H292及H1975放疗敏感性的影响；流式细胞技术检测尼妥珠单抗联合放疗对细胞周期分布及细胞凋亡的影响；运用Western Blot技术检测细胞胞浆及胞核γ-H2AX、DNA-PK/p-DNA-PK、EGFR/p-EGFR的表达，探索尼妥珠单抗影响放疗敏感性的潜在机制。
　　结果：尼妥珠单抗单药抑制EGFR高表达的H292细胞的增殖，而对EGFR低表达的H1975细胞的增殖无明显影响；与单纯放疗相比，尼妥珠单抗联合放疗明显抑制H292细胞的增殖活力（p<0.05）；含1％FBS或10％FBS的尼妥珠单抗对H292细胞都表现出放疗增敏作用，但含1％FBS的尼妥珠单抗溶液具有显著性统计学差异；H292与H1975的SER（放疗增敏比）分别为1.304和1.092，尼妥珠单抗明显增强H292细胞的放疗敏感性；放疗后48h尼妥珠单抗阻滞H292细胞周期于G0/G1期（p<0.05），不影响H1975细胞周期分布；尼妥珠单抗联合放疗不能显著增加两种细胞的凋亡细胞比例；与H1975细胞相比，尼妥珠单抗增强γ-H2AX在H292细胞胞浆及胞核蛋白中的表达(P<0.05）。尼妥珠单抗降低两种细胞胞核EGFR/p-EGFR的表达，当与放疗联合时，这种EGFR阻滞在H292细胞表现得更加明显；尼妥珠单抗联合放疗明显降低H292细胞而非H1975细胞胞核p-DNA-PK的表达。
　　结论：1.尼妥珠单抗单药抑制EGFR高表达细胞H292的增殖；2.尼妥珠单抗对H292细胞有放疗增敏作用；3.尼妥珠单抗联合放疗48h后将H292细胞周期阻滞于G0/G1期，不影响H1975细胞周期分布；4．尼妥珠单抗联合放疗不能显著诱导H292细胞及H1975细胞的凋亡。5.尼妥珠单抗联合放疗增加H292细胞的DNA损伤，同时伴随核内EGFR、DNA-PK磷酸化蛋白的降低，提示尼妥珠单抗可能是通过抑制EGFR的核转位，降低核内DNA双链断裂的损伤修复能力发挥放疗增敏作用。

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