活化肝星状细胞对肝癌细胞迁移和侵袭能力的影响

摘要

肝细胞肝癌（HCC）是最常见的恶性肿瘤之一，随着对HCC形成和进展认识的不断深入，越来越多的研究者将注意力从肝癌细胞本身转移到了肿瘤微环境中间质细胞和肝癌细胞的相互作用。肝癌的侵袭及转移是长久以来备受关注的问题，它是一个多步骤、多因素参与的复杂过程，其发生依赖于肿瘤细胞与基质之间的相互作用。肝星状细胞（HSC）作为肝癌微环境中最重要的间质细胞，其促肝纤维化作用已得到证实。有研究显示肝癌细胞可特异性驱动HSC活化，并促进其增殖。而活化的HSC也能促进肝癌细胞增殖。为了证实两者的相互作用，本实验拟以人肝星状细胞HSC-T6与人肝癌细胞SMMC-7721为研究对象，探究活化HSC条件培养基（CM）对培养肝癌细胞生物学行为的影响。进一步阐明活化HSC与肝癌细胞之间的作用关系，以期为寻找肝癌治疗新靶标提供实验依据。
　　方法：
　　1、1％血清的DMEM培养HSC-T6，收集第24h的HSC培养基上清作为条件培养基（conditioned medium,CM）。
　　2、用不同浓度的CM（0%,25%,50%,100%）培养人肝癌细胞SMMC-7721。
　　3、免疫组化检测SMMC-7721细胞MMP-2、E-cadherin表达的改变。
　　4、MTT、平板克隆、划痕修复、Transwell侵袭实验观察活化HSC对SMMC-7721细胞增殖、迁移、侵袭的影响。
　　5、血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）实验观察活化HSC对SMMC-7721细胞血管生成拟态的影响。
　　结果：
　　1、免疫组化结果显示：与对照组（0%CM）相比，各浓度CM实验组SMMC-7721细胞的MMP-2蛋白表达量增高，以50%CM组和100%CM组增高显著（P＜0.05）；各浓度CM实验组SMMC-7721细胞的E-cadherin蛋白表达量降低，以50%CM组和100%CM组降低显著（P＜0.01）。
　　2、MTT结果显示：与对照组（0%CM）相比，不同浓度CM（25%、50%、100%）均显著促进SMMC-7721细胞的增殖（P＜0.01）。
　　3、平板克隆形成实验示：与对照组（0%CM）相比，不同浓度CM（25%、50%、100%）均显著增强SMMC-7721细胞的集落形成能力（P＜0.05）。
　　4、划痕修复实验示：与对照组（0%CM）相比，不同浓度CM（25%、50%、100%）均显著增强SMMC-7721细胞的迁移性（P＜0.05）。
　　5、Transwell细胞侵袭实验示：与对照组（0%CM）相比，50%CM和100%CM组均显著增强SMMC-7721细胞的侵袭性（P＜0.05）。
　　6、血管生成拟态实验示：与对照组（0%CM）相比，100%CM组明显增强SMMC-7721细胞成血管拟态能力（t=6.944，P<0.001）。
　　结论：
　　活化的人肝星状细胞HSC-T6能增强人肝癌细胞系SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭能力。相信随着对肝星状细胞研究的更加深入，其会为肝癌术后的综合治疗带来新的思路。

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综述:肝细胞癌侵袭转移相关因素的研究进展

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