蛋白酶Nexin-1通过抑制凋亡抑制蛋白XIAP促进AML细胞对阿糖胞苷的敏感性

摘要

目的：
　　检测和探索蛋白酶Nexin-1（PN1）在急性髓系白血病（AML）细胞中的表达及其作用，同时验证在AML中PN1对凋亡抑制蛋白XIAP的抑制作用。进而探索和验证PN1是否通过抑制AML细胞中XIAP的表达来促进AML对阿糖胞苷的敏感性，为解决AML治疗中的阿糖胞苷耐药问题提供新的思路和理论依据。
　　方法：
　　通过电转染和脂质体转染方法分别将PN1质粒及siRNA整合入AML细胞中，利用实时荧光定量PCR和Western Blot检测AML细胞系中PN-1、XIAP的相对表达，采用PI-AnnexinV标记细胞和流式细胞学方法检测细胞的凋亡。利用CCK8试剂检测细胞增值，确定阿糖胞苷作用于AML细胞的最适浓度及时间；电转染PN1质粒同时加阿糖胞苷处理AML细胞后，检测细胞的凋亡情况以判断AML对阿糖胞苷敏感性，同时检测PN1和XIAP的表达以确定其作用机制。
　　结果：
　　PN1在五株AML细胞系中均有表达，且表达水平不同。上调PN1后AML细胞的凋亡增加，且AML细胞内XIAP的RNA水平及蛋白水平均降低，下调PN1后结果相反。经阿糖胞苷处理后，AML细胞中XIAP的表达升高。阿糖胞苷处理联合转染PN1后，细胞内XIAP较阿糖胞苷单独处理组低，且细胞凋亡较高。即上调的PN1可以抑制阿糖胞苷诱导的XIAP的表达。
　　结论：
　　PN1可诱导AML细胞系发生凋亡，是AML细胞内XIAP的天然抑制子。PN1可抑制阿糖胞苷诱导的AML细胞内XIAP的表达，从而促进AML细胞对阿糖胞苷的敏感性。

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中文摘要

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前言

材料与方法

一、实验材料与试剂

二、实验仪器

三、实验方法及步骤

四、实验统计学方法

实 验 结 果

一、阿糖胞苷诱导AML细胞系中XIAP的表达

二、PN1是AML细胞系内XIAP的天然抑制子

三、PN1可诱导AML细胞凋亡

四、PN1通过抑制XIAP促进AML细胞凋亡

讨论

参考文献

综述: 蛋白酶Nexin-1的研究进展

致谢