Wnt/β-catenin信号通路抑制蛋白DKK1在鼓室硬化中表达水平的研究

摘要

本文对Wnt/β-catenin信号通路抑制蛋白DKK1在鼓室硬化中表达水平进行了研究。本研究分为两个部分：
　　第一部分：Wnt/β-catenin信号通路抑制蛋白DKK1在实验性鼓室硬化中的表达。
　　目的：构建鼓室硬化动物模型，检测DKK1蛋白在大鼠鼓室硬化中的表达水平并探究其在鼓室硬化发病机制中可能发挥的作用。
　　方法：将检查合格的成年雄性SD大鼠40只随机分为空白对照组（n=20只）和实验组（n=20只）。应用鼓膜切开法将实验组大鼠的左侧鼓膜后下象限作2mm的切口进行鼓室硬化模型的构建，右侧鼓膜不予处理，作为对照。两周后，在光学显微镜下观察两组大鼠鼓膜钙化情况并应用HE染色法来观察两组大鼠鼓膜及中耳粘膜的组织形态学改变情况。同时采用免疫组织化学法及Western blot法来检测DKK1蛋白在两组大鼠鼓膜及鼓室粘膜组织中的表达情况。
　　结果：第二周时显微镜下观察发现，实验组大鼠左侧鼓膜切口完全愈合，鼓膜出现明显的钙化斑，总钙化率为70%。HE染色发现实验组大鼠鼓膜及中耳粘膜组织中出现明显的纤维组织增生及玻璃样变性。免疫组织化学显示DKK1蛋白在实验组大鼠鼓膜及中耳粘膜组织中均有明显表达，且主要表达于上皮细胞及成纤维细胞胞质内。Western blot法检测发现，与对照组相比，实验组中发生钙化的鼓膜及鼓室粘膜组织中DKK1蛋白表达水平显著下降（P＜0.05）。
　　结论：DKK1蛋白在大鼠鼓室硬化中的表达水平显著性降低，表明DKK1蛋白可能参与了大鼠鼓室硬化的形成。
　　第二部分：Wnt/β-catenin信号通路抑制蛋白DKK1在临床鼓室硬化中的表达水平。
　　目的：鼓室硬化的发病机制至今不明，需要我们进一步去研究。我们前期工作中发现Dickkopft-1(DKK1)蛋白在大鼠鼓室硬化模型中的表达水平显著降低，表明DKK1蛋白可能参与了与大鼠鼓室硬化的形成。然而，尽管动物实验表明DKK1蛋白可能与鼓室硬化的形成有关，但却缺乏相关的临床研究去证实这一结论。因此，本部分实验通过对比正常健康志愿者、慢性化脓性中耳炎患者及鼓室硬化患者血清中DKK1蛋白的表达水平，来进一步探讨DKK1蛋白是否与鼓室硬化的形成有关。
　　方法：分别收集15例正常健康志愿者、15例鼓室硬化患者及20例慢性化脓性中耳炎患者的血清标本，离心后取上清备用。标本收集完毕后采用酶联免疫吸附法分别检测上述三组血清中DKK1的表达水平。
　　结果：⑴与正常组血清DKK1蛋白表达水平相比，鼓室硬化组表达水平明显降低，其差异有统计学意义；⑵与正常组血清DKK1蛋白表达水平相比，慢性化脓性中耳炎组血清DKK1表达水平轻微降低，但差异没有明显统计学意义。
　　结论：两组实验结果进行统计学分析后发现，正常组与鼓室硬化组患者血清中DKK1蛋白表达水平有统计学差异，这一实验结果进一步证明了DKK1蛋白可能参与了鼓室硬化的形成。

目录

声明

主要中英文缩略词表

第一部分Wnt/β-catenin信号通路抑制蛋白DKK1在实验性鼓室硬化中的表达

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

第二部分Wnt/β-catenin信号通路抑制蛋白DKK1在临床鼓室硬化中的表达水平

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

总结

综述：鼓室硬化的病因学研究进展

附录一

致谢