脂氧素A4抑制破骨细胞生成及防止卵巢切除后骨质流失

摘要

目的：
　　1.研究LXA4对RAW264.7细胞向破骨细胞分化和成熟破骨细胞功能的影响；
　　2.研究LXA4在RAW264.7细胞中影响破骨细胞分化和功能的具体分子机制；
　　3.观察在小鼠卵巢切除动物模型中，经LXA4干预后，小鼠骨微结构及其他血清指标的变化情况。
　　方法：
　　1.采用CCK-8法检测实验所需浓度的LXA4和Boc-2对于RAW264.7细胞增殖的影响；测定LXA4受体FPR2/ALX在RAW264.7细胞及成熟破骨细胞中的表达，并观察受体拮抗剂对其表达的影响；在RANKL诱导的条件下使RAW264.7细胞向破骨细胞分化，并利用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测LXA4及其受体拮抗剂对破骨细胞发生和TRAP酶活性的影响；通过骨板吸收实验观察LXA4对于成熟破骨细胞骨吸收功能的影响。
　　2.通过实时定量 RT-PCR和 Western Bloting检测 LXA4在 RANKL诱导条件下RAW264.7细胞向破骨细胞分化的进程中对相关标志性基因表达和相关信号通路的影响；采用化学发光法凝胶电泳迁移率实验检测LXA4对NF-κB和AP-1的调节作用。
　　3.利用卵巢切除手术建立12周龄雌性C57/BL6小鼠骨质疏松动物模型，给予实验组LXA4（10μg/kg/d）腹腔注射治疗，于6周后取股骨进行μ-CT骨微结构扫面和骨切片TRAP染色，并检测血清中相关炎性因子水平。
　　结果：
　　1. LXA4能够显著抑制RAW264.7细胞向破骨细胞分化和成熟破骨细胞的功能，这一效应能够被LXA4受体FPR2/ALX的特异性拮抗剂Boc-2所阻断；
　　2. LXA4能够抑制破骨细胞特异性基因的表达，包括TRAP、MMP-9、组织蛋白酶K、RANK；破骨细胞相关转录因子c-Fos、NFATc1的表达也可被LXA4抑制；同时，LXA4降低了PI3-AKT以及MAPKs通路中p-38、ERK、JNK的活化，抑制了RANKL诱导的NF-κB和激活蛋白-1的激活和活性氧的产生。
　　3. LXA4能够显著抑制小鼠骨质疏松模型中卵巢切除所致的骨流失，并降低血清中RANK与骨保护素比值以及相关炎症因子水平。
　　结论：
　　LXA4可以通过对RANK-RANKL通路的抑制以及下调其下游相关信号转导通路和相关基因，蛋白的表达来发挥抑制破骨细胞分化和活性的效果，并且在卵巢切除后骨质疏松小鼠动物模型中对改善骨微结构具有明显效应，因此LXA4可能成为治疗骨质疏松和破骨细胞相关疾病的新契机。

目录

华中科技大学博士学位论文创新点概述

声明

前言

第一部分 脂氧素A4抑制RAW264.7细胞向破骨细胞分化和成熟破骨细胞的骨吸收功能

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 脂氧素A4抑制破骨细胞分化和功能的具体机制

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第三部分 脂氧素A4抑制卵巢切除后小鼠模型的骨质流失

引言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

综述：骨质疏松、炎症与脂氧素

附录一：英文缩写词表

附录二：攻读博士学位期间发表的论文以及参与的课题

致谢