PAX5基因突变肿瘤微环境中浸润性T细胞变化

摘要

目的：急性B淋巴细胞白血病中约30%涉及PAX5基因突变，但其在影响免疫系统方面并无详细的研究。随着生物治疗的蓬勃发展，越来越多的疾病可以运用免疫治疗来应对。因此，我们考虑利用小鼠模型来判断PAX5基因突变是否会引起肿瘤组织中浸润性免疫细胞的改变。如果确实出现了某种免疫成分的改变，我们是否可以通过当下现有的免疫治疗方式来提高具有该基因型肿瘤的缓解率。 方法：在我们的研究中，我们首先通过寻找到小鼠PAX5基因的功能域，然后利用CRISPR-Cas9基因编辑技术对小鼠B细胞淋巴瘤细胞系A20中PAX5基因进行敲除，得到突变株。在转录水平以及蛋白水平分别进行敲除效率验证后，我们则利用该突变株及野生株分别对Balb/c小鼠进行皮下瘤造模。2周后取出瘤块分别行免疫组化、实时定量PCR以及流式检测，观察两组瘤块中T细胞的差异。 结果：成功敲除A20细胞株中PAX5基因，并得到3株突变株。经过实时定量PCR和蛋白印迹技术验证，可以证实突变株株PAX5基因确实表达下降。在比较突变株形成的皮下瘤与野生株形成的皮下瘤后，我们发现突变组小鼠皮下瘤中CD4+、CD8+、CD3+细胞均较高且前者CD4+T细胞表面CTLA-4表达显著增高，并具有统计学差异，此外，突变组肿瘤中FOXP3、CD127表达都较野生组肿瘤高 结论：我们选用了三株突变细胞株，成瘤后结果一致，基本上可以排除单独细胞株带来的个体差异以及基因敲除技术可能带来的影响，因此我们可以判断我们所发现的浸润性T细胞差异就是由PAX5基因突变所致。由于突变组肿瘤中CD4、CTLA-4、FOXP3、CD127表达均较对照组高，我们可以推断出突变组肿瘤中CTLA-4表达及调节性T细胞是增高的，因此PAX5基因突变可能导致肿瘤微环境中效应T细胞不能增殖活化，从而造成肿瘤细胞的免疫逃逸。我们后续会继续通过收集患者标本及动物药物试验来验证这一想法。

目录

第一个书签之前

摘 要

Abstract

前 言

材料方法

结 果

二．Balb/c小鼠皮下瘤模型构建

三．肿瘤组织中T淋巴细胞荧光定量PCR结果

四、肿瘤组织中CD4+T细胞亚群关键转录因子荧光定量PCR结果

五．两组肿瘤中免疫检查点RT-PCR结果

六．两组肿瘤中部分免疫组化结果

七．两组肿瘤中T淋巴细胞流式检测结果

讨 论

参考文献

综述

肿瘤免疫逃逸形式与调节性T细胞概述

肿瘤的免疫应答

T细胞炎症性肿瘤与非T细胞炎症性肿瘤

三、非T细胞性免疫逃逸机制

四、T细胞炎症性免疫逃逸

五、免疫检查点CTLA-4与调节性T细胞

致 谢

附录