MSH6突变导致Lynch综合征相关性子宫内膜癌的分子致病机制研究

摘要

Lynch综合征（Lynch Syndrome，LS）主要是由DNA错配修复基因（MLH1、MSH2、MSH6、PMS2）种系突变导致的一种常染色体显性遗传的疾病。根据临床表型不同一般被分为两种类型，Lynch Ⅰ型表现为遗传性结直肠癌，也是LS患者中最常见的；Lynch Ⅱ型是结直肠外多种恶性肿瘤综合征的统称，例如胃癌、肠癌、乳腺癌、子宫内膜癌等。Lynch综合征相关性子宫内膜癌属于Lynch Ⅱ型中的一种，其MSH6突变占LS-EC患者的比例达10-13%。 本课题组收集并鉴定了一个有三位患者临床表现均为子宫内膜癌的家系，家系调查发现其父亲因结肠癌去世多年。为了寻找该家系致病基因，取先证者及家系中正常人的DNA样本进行外显子组测序和Sanger测序分析，检测到MSH6的一个未报道的杂合剪接突变c.458-2A＞G。通过限制性片段长度多态性（RFLP）分析发现，家系中三位患者携带该突变，还有三位目前表型正常但是携带此突变的成员，而其他成员均无此突变，在100个家系外正常人中也未发现此改变。为了探究此剪接突变的致病机制，提取患者和不携带该突变的家系中正常人外周血RNA，反转录PCR和测序分析发现，c.458-2A＞G突变导致剪接时跳跃了3号外显子，产生缺失170bp的mRNA。对野生型和异常的mRNA二级结构预测，结果显示其自由能分别为-1310.46kcal/mol、-1266.81kcal/mol，说明异常转录本的稳定性与野生型相比没有太大差异。异常剪接的转录本在第154位密码子发生移码，并在移码后第8个密码子处产生提前终止，产生丢失了绝大部分功能结构域的截短蛋白质（p.Ser154Argfs*8，野生型MSH6蛋白包含1360个氨基酸）。同时，对患者（2人）和正常人MSH6正常转录本进行实时定量PCR检测，结果显示患者相比于正常人分别下降了53%和54%。为了检测突变造成的截短蛋白在细胞中是否降解，构建野生型和突变型MSH6蛋白表达的真核载体，蛋白质免疫印迹检测到截短蛋白仍然存在，但是表达量相比于野生型显著降低。已知MSH6蛋白质需要入核发挥功能，通过细胞免疫荧光检测蛋白质亚细胞定位情况，发现野生型蛋白能正确定位到细胞核中，但是突变型蛋白在细胞核和细胞质均有分布，该截短的蛋白质是否仍然发挥其它作用待进一步研究。 综上所述，本研究在Lynch综合征相关性子宫内膜癌家系中鉴定MSH6的一个新的剪接突变c.458-2A＞G，该突变导致患者体内正常等位基因表达下降约一半；异常等位基因表达出现定位变化，上述结果可能是导致子宫内膜癌发生的原因。该研究丰富了MSH6致病突变谱，同时发现该家系中三位目前无表型携带者，对其早期预防、早期临床诊断与治疗具有重要意义。

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