声明
主要缩略词
第一部分PID1在肝癌中的的作用及机制研究
1 前 言
2 材料与方法
2.1 实验动物
2.2 实验细胞和临床样本
2.3 主要试剂及耗材
2.4 主要仪器、设备
2.5 细胞培养
2.6 PID1过表达质粒的构建
2.7 肝癌移植瘤小鼠模型的构建和给药
2.8 流体力学注射法构建肝脏特异性过表达PID1小鼠模型
2.9Mouse Inflammation CBA Kit检测小鼠血清炎症因子水平
2.10 实时荧光定量RT-PCR
2.11 Western blot
2.12 流式细胞术
2.13 染色质免疫共沉淀
2.14 免疫共沉淀
2.16 糖酵解测定
2.17 统计学分析
3 结 果
3.1 PID1在肝癌细胞中高表达
3.2 PID1在人肝癌组织cDNA芯片中高表达
3.3 免疫组化结果显示PID1在临床肝癌样本中高表达
3.4 PID1的启动子可能存在H3K4me3甲基化修饰
3.5 肝癌细胞及临床肝癌样本中PID1的高表达受H3K4me3的调控
3.6 干扰PID1抑制肝癌移植瘤的生长
3.7 干扰PID1促进移植瘤鼠的抗肿瘤免疫
3.8 干扰PID1抑制移植瘤生长的分子机制
3.9 PID1肝脏过表达诱导肝癌形成
3.10 PID1过表达诱导血脂升高
3.11 PID1过表达促进肝脏糖酵解代谢
3.12 肝脏过表达PID1激活增殖相关抗原表达
3.13 肝脏过表达PID1激活EGFR/KRAS/ERK通路
3.14 PID1通过与EGFR结合激活EGFR/KRAS/ERK通路
3.15 阻断EGFR后PID1的促肿瘤作用消失
3.16 PID1对脂质代谢的作用不依赖于EGFR通路
4 讨 论
第二部分PID1抑制抗肿瘤免疫的作用及机制研究
1 前 言
2 材料与方法
2.1 实验动物
2.2 主要试剂
2.4实验动物处理
2.5 肝脏非实质细胞的提取与分离
2.6 肝脏免疫细胞的比例和功能检测
2.7 磁珠分选肝脏MDSCs
2.7 MDSCs对T细胞的抑制作用检测
2.8 qRT-PCR检测肝脏免疫相关基因的表达
2.9 免疫共沉淀检测PID1和ARG1的相互作用
2.10 统计学分析
3 结 果
3.1 PID1肝脏过表达小鼠的肝脏免疫浸润细胞筛选
3.2 PID1肝脏过表达诱导了系统性的免疫抑制
3.3 PID1肝脏过表达抑制肝脏促炎细胞因子、促进抗炎细胞因子的转录
3.4 PID1与MDSCs活性标志分子ARG1有相互作用
3.5 PID1过表达小鼠肝脏MDSCs的活性增强
3.6 PID1过表达增强了MDSCs对T细胞的抑制作用
3.7 PID1对免疫的抑制作用不依赖于EGFR通路
4 讨 论
第三部分PID1负调控胰岛素抵抗的作用及机制研究
1 前 言
2 材料与方法
2.1 实验动物
2.2实验试剂
2.3主要仪器设备
2.4小鼠的给药及处理
2.5肝脏组织细胞核及细胞质蛋白抽提
2.6凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）
2.7 FABP1及PPARα免疫荧光
2.8 细胞胰岛素抵抗模型构建
2.9糖吸收
2.10 平板克隆形成
2.11 线粒体膜电位的检测
2.12免疫共沉淀、qRT-PCR、Western blot等参见第一和第二部分
2.13统计学分析
3 结 果
3.1 干扰PID1促进ob/ob小鼠肝脏FABP1和PPARα的表达
3.2 干扰PID1促进ob/ob小鼠脂肪PPARγ、抑制FABP4的表达
3.3 干扰PID1增强PPARα的转录活性
3.4 干扰PID1促进FABP1入核
3.5 干扰PID1抑制小鼠肝细胞AML12生长
3.6 胰岛素促进肝癌细胞增殖
3.7 胰岛素抵抗状况下肝癌细胞增殖能力增强
3.8 胰岛素抵抗状况下肝细胞的原癌基因、肿瘤干细胞基因激活
4 讨 论
全文总结
参考文献
综述:肥胖相关胰岛素抵抗促肝癌的机制研究进展
致谢
攻读博士期间撰写和发表的论文
