糖胃康对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦SCF-Kit信号途径影响的研究

摘要

目的：
　　 在系统整理研究古代文献的基础上，结合现今消渴及其并发症的发病特点，对消渴胃病(糖尿病胃轻瘫)的理法方药进行理论探讨，丰富中医学对消渴胃病的认识；探讨糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦SCF-Kit信号途径在Cajal间质细胞受损中的作用，进一步阐明中药糖胃康治疗糖尿病胃轻瘫的作用部位、环节及分子机制，为临床开发防治糖尿病胃轻瘫的有效中药制剂奠定基础。
　　 方法：
　　 理论研究：对消渴胃病的历史源流、病机特点及防治方法等进行分析研究，讨论糖胃康的组方原则及药效分析。
　　 实验研究：采用链脲佐菌素及高糖高脂饲料不规则喂养(即单日上午进食，双日下午进食)诱导糖尿病胃轻瘫大鼠模型，随机分为7组(正常对照组、糖尿病模型组、糖尿病胃轻瘫模型组、糖胃康高剂量组、糖胃康中剂量组、糖胃康低剂量组和西沙比利治疗组)进行实验研究。观察糖胃康对糖尿病胃轻瘫模型组大鼠糖、脂代谢及胰岛β细胞功能的影响；通过透射电镜观察各组大鼠胃窦组织ICC超微结构的变化；采用Western blot检测各组大鼠胃窦平滑肌组织c-kit蛋白、SCF蛋白表达水平，RT-PCR测定各组大鼠胃窦平滑肌组织SCF mRNA的表达。
　　 结果：
　　 1.消渴胃病具有“本虚标实竹的病机特点，且“本虚之中，脾虚为要竹、“标实之中，毒邪为甚”，糖胃康针对此病机而设，具有健脾和胃，理气排毒之功效。
　　 2.糖尿病及糖尿病胃轻瘫造模研究中：在造模后前4周糖尿病模型组及糖尿病胃轻瘫模型组大鼠与正常对照组大鼠相比较，日进食量均明显增加，有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，且以糖尿病模型组尤为明显；糖尿病胃轻瘫模型组大鼠第6周后，日进食量减少，第8周与正常对照组相比较，有统计学意义(P＜0.01)；与糖尿病模型组相比较，第4周后，糖尿病胃轻瘫模型组大鼠日进食量减少，有显著性差异(P＜0.01)。造模后前2周，糖尿病模型组和糖尿病胃轻瘫模型组大鼠日饮水量均显著增加，与正常对照组比较，有显著性差异(P＜0.01)；造模4周后，糖尿病胃轻瘫模型组大鼠日饮水量较糖尿病模型组减少，第6周后尤为明显，有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。糖尿病模型组和糖尿病胃轻瘫模型组大鼠体重随着时间的延长(造模2周后)均呈现体重下降的趋势，与正常对照组相比较，有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01)，且以糖尿病胃轻瘫组大鼠下降尤为明显；与糖尿病模型组相比较，糖尿病胃轻瘫模型组大鼠体重下降有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)。同时，造模后糖尿病模型组及糖尿病胃轻瘫模型组大鼠均出现大便量少、色淡、质稀软、互相粘连、不成形等大便性状的改变，且以糖尿病胃轻瘫模型组大鼠尤为明显。在胃排空功能的测定方面，糖尿病模型组和糖尿病胃轻瘫模型组大鼠胃排空功能均有所下降，与正常对照组相比较，糖尿病模型组大鼠胃排空下降无统计学意义(P＞0.05)，而糖尿病胃轻瘫模型组大鼠有显著性差异(P＜0.01)。
　　 3.糖胃康对糖尿病胃轻瘫模型大鼠糖脂代谢和胰岛β细胞功能影响的研究中：糖胃康高、中剂量组分别与糖尿病胃轻瘫模型组相比较，大鼠空腹血糖及胰岛素水平均明显下降(P＜0.01)，胰岛素敏感指数均升高(P＜0.01)、抵抗指数均降低(P＜0.01)；胰岛形状较规则，细胞数量增多，胞浆较丰富；胰岛β细胞团平均面积均明显增大(P＜0.05)；且胃排空功能与西沙比利治疗组相比较无明显差异。说明高、中剂量的糖胃康可通过其有效的降糖作用来改善IR，又可以通过其改善IR的作用，增加胰岛素敏感性，恢复胰岛β细胞的分泌功能，缓解糖尿病胃轻瘫的临床症状。模型组(糖尿病模型组和糖尿病胃轻瘫模型组)大鼠胰岛内有明显的脂质沉积，可能是糖尿病及糖尿病胃轻瘫形成的重要病理因素。实验后期，模型组大鼠体重出现了明显的下降，且以糖尿病胃轻瘫模型组为甚，分析原因可能为血糖较高，细胞供能不足，机体分解脂肪供能而导致的消瘦，与临床上未经控制的血糖，糖尿病病程进展而出现“消瘦”的临床特征相符合；糖尿病胃轻瘫模型组大鼠因饮食减少，供能更为不足而致体重下降更加明显。药物干预后，糖胃康高、中剂量组大鼠体重均明显增加，内脏脂肪/体重均明显降低，说明其对血脂具有调节作用，能够延缓糖尿病病程进展。
　　 4.糖胃康对糖尿病胃轻瘫模型大鼠Cajal间质细胞的影响研究中：电镜观察结果显示，糖尿病胃轻瘫模型组大鼠胃窦ICC与其它的ICC之间、平滑肌细胞之间以及神经末梢之间的缝隙连接明显减少，尚存细胞间的连接结构不清，间隙增大。部分ICC的基膜与细胞膜分离，形成空洞；线粒体肿胀、空泡样变、甚至溶解；胞质广泛溶解，有大量的胞质内空泡形成；细胞器数量减少明显。药物干预后，糖胃康高、中剂量组大鼠胃窦ICC与其它的ICC之间、平滑肌细胞之间以及神经末梢之间的缝隙连接均明显增多，ICC的基膜结构趋于完整，部分线粒体轻度肿胀，细胞器数量较正常对照组无明显差异。Wes tern blot检测显示：糖尿病胃轻瘫模型组大鼠胃窦平滑肌组织c-kit蛋白表达水平显著降低，与正常对照组相比，具有显著性差异(P＜0.01)；药物干预后，糖胃康高、中剂量组大鼠胃窦平滑肌组织c-kit蛋白表达水平较糖尿病胃轻瘫模型组均显著升高(P＜0.01)，且与正常对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。
　　 5.糖胃康对糖尿病胃轻瘫模型大鼠SCF蛋白和基因表达的影响研究中：糖尿病胃轻瘫模型组大鼠胃窦平滑肌组织SCF的m RNA及蛋白质相对表达水平均显著降低，与正常对照组相比，具有显著性差异(P＜0.01)；药物干预后，糖胃康高、中剂量组大鼠胃窦平滑肌组织SCF的m RNA及蛋白质相对表达水平较糖尿病胃轻瘫模型组均显著升高，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，且与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　 结论：
　　 1.脾虚失运是消渴病形成的关键环节，热毒、湿毒、瘀毒、浊毒等毒邪既是消渴病的病理产物，又是消渴胃病形成的重要致病因素。消渴胃病具有“本虚标实”的病机特点，且“本虚之中，脾虚为要”、“标实之中，毒邪为甚”，治疗原则上应病证结合、标本兼顾。针对消渴胃病“脾虚毒盛”的主要病机，结合中医药理论及现代药理研究，精心组方而成的糖胃康具有健脾和胃，理气排毒的功效。
　　 2.在单次腹腔注射STZ的基础上，采用高糖高脂饲料不规则喂养(即单日上午进食，双日下午进食)的方法能成功复制糖尿病胃轻瘫模型。
　　 3.糖胃康对糖尿病胃轻瘫模型大鼠糖、脂代谢紊乱具有明显的改善作用，在一定程度上能改善IR，恢复胰岛β细胞的功能，增强DGP的胃排空功能，且呈一定的量效关系。糖胃康可通过改善糖尿病胃轻瘫模型大鼠糖、脂代谢紊乱，上调SCF表达水平，调控ICC的分化、发育和表型维持，恢复SCF/Kit的信号传递系统通路，从而使胃平滑肌收缩功能改变，增强DGP的胃排空功能。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词表

声明

前言

第一部分理论研究

一、“脾虚致消”学说的探讨

1.中医脏象“脾”与现代医学所指“胰腺”的类似性

2.中医学“脾主运化”与现代医学胰腺外分泌功能的一致性

3.中医学“脾失运化”与现代医学胰腺外分泌功能失常的相似性

4.“从脾治消”的理论探讨

二、“脾虚毒盛”是消渴胃病的病机特点

1.毒邪与消渴的关系

2.毒邪与消渴并发症的关系

3.消渴胃病的基本病机

三、消渴胃病的临证思路

四、糖胃康的组方分析

参考文献

第二部分实验研究

实验一糖尿病和糖尿病胃轻瘫模型大鼠的建立

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

实验二“糖胃康”对糖尿病胃轻瘫模型大鼠糖脂代谢和胰岛β细胞功能的影响

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

实验三“糖胃康”对糖尿病胃轻瘫模型大鼠胃窦Cajal间质细胞的影响

一、“糖胃康”对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦组织Cajal间质细胞超微结构的影响

二、“糖胃康”对糖尿病胃轻瘫大鼠胃窦平滑肌c-kit蛋白表达的影响

三、讨论

实验四“糖胃康”对糖尿病胃轻瘫模型大鼠胃窦SCF蛋白和基因表达的影响

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结语

文献综述

综述一干细胞因子和Cajal间质细胞与糖尿病胃轻瘫关系的研究进展

综述二中医学对糖尿病胃轻瘫的认识

附图

致谢