肾气丸对庆大霉素诱导大鼠耳肾损伤模型Notch2/hes1信号通路的影响及机制

摘要

目的:肾气丸对庆大霉素诱导大鼠耳肾损伤模型Notch2/hes1信号通路的影响及机制。
　　 方法:成熟SD大鼠随机分成空白组、模型组、DAPT组、肾气丸组。采用庆大霉素(120mg/(kg·d)，腹腔注射，持继10天）造模。在造模前及造模后1、14、28天，应用听觉脑干诱发电位(ABR)检测听力变化;应用耳蜗铺片观察耳蜗毛细胞损伤及修复情况。应用光镜和电镜观察肾小管损伤情况及药后恢复情况。应用免疫荧光观察表达耳肾Ki67阳性细胞的情况;免疫组化观察Jag2/Notch2/hes1信号在肾小管表达情况;应用免疫印迹蛋白、实时定量PCR观察大鼠Jag2/Notch2/hes1信号通路在造模后1、14、28天在耳蜗和肾组织表达情况。
　　 结果:肾脏检测结果:病理检测:在空白组，各时段的肾小管没有明显变化。模型组，在第1天，肾小管受到严重损伤;14天，肾小管损伤明显减轻;28天，肾小管基本恢复正常;在第1、14天，与模型组相比，DAPT组造成的肾脏损伤程度明显减轻;在28天，模型组和DAPT组肾小管基本恢复正常。在第1、14天，与模型组相比，肾气丸组的肾脏损伤程度明显减轻;在第28天，肾气丸组和模型组肾小管基本恢复正常。免疫组化、免疫印迹蛋白、RT-PCR显示:模型组造模后1、14天，Jag2/Notch2/hes1在肾小管上皮细胞的表达明显升高(P＜0.05);在第28天，与空白组相比表达无明显差异(P＞0.05)。在第1、14天，DAPT组与模型组相比Jag2/Notch2/hes1的表达明显下降(P＜0.05);在第28天，两组表达无明显差异(P＞0.05);在DAPT组内，第28天与第1、14天相比，Jag2/Notch2/hes1的表达明显下降(P＜0.05)。造模后1、14天，肾气丸组Jag2/Notch2/hes1在肾小管上皮细胞的表达与模型组相比明显下降(P＜0.05);在第28天，两组表达无明显差异(P＞0.05);在肾气丸组内，第28天与第1、14天相比，Jag2/Notch2/hes1的表达明显下降(P＜0.05)。免疫荧光显示:在空白组，Ki67阳性表达细胞占2.52％;在模型组，造模后第1、14天，Ki67阳性表达细胞与空白组相比明显升高;在28天，空白组与模型组无明显差异。DAPT和肾气丸组与模型组相比，第1、14天，Ki67阳性表达细胞明显升高;在28天，肾气丸组和DAPT组与模型组无明显差异。
　　 耳检测结果:听觉脑干诱发电位(ABR)显示:空白组无明显变化;模型组与用药前ABR阈值相比明显升高，并随时间的延长阈值下降。DAPT组和肾气丸组ABR阈值与用药前相比均明显升高，并随时间的延长阈值下降(P＜0.05);在造模后第28天，DAPT组与模型组相比ABR阈值明显下降;在造模后第28天，肾气丸组与模型组相比ABR阈值明显下降。耳蜗铺片显示:造模后1、14、28天，模型组与空白组相比毛细胞明显损伤;在模型组，毛细胞的损伤程度在28天时段明显减轻。在造模后1、14、28天，DAPT组与模型组相比毛细胞损伤明显减轻;在DAPT组，造模后28天与第1天相比，毛细胞损伤明显减轻。在造模后1、14、28天，肾气丸组与模型组相比毛细胞损伤明显减轻;在肾气丸组，造模后28天与第1天相比，毛细胞损伤明显减轻。免疫印迹蛋白、实时定量PCR显示:与空白组相比，模型组Jag2/Notch2/hes1的表达明显增高(P＜0.05)，并随时间的延长，表达强度下降。同时段的DAPT组与模型组相比Jag2/Notch2/hes1的表达明显下降(P＜0.05); DAPT组内，第28天与第1天相比，Jag2/Notch2/hes1的表达明显下降(P＜0.05)。同时段的肾气丸组与模型组相比，Jag2/Notch2/hes1的表达均明显下降(P＜0.05);在肾气丸组内，第28天与第1天相比，Jag2/Notch2/hes1的表达明显下降(P＜0.05)。免疫荧光显示:免疫荧光显示:在空白组Ki67阳性表达细胞占1.42％;在模型组，造模后第1、14、28天，Ki67阳性表达细胞明显升高;DAPT组和肾气丸组与模型组相比，在相同时段的Ki67阳性表达细胞明显升高。
　　 结论:Jag2/Notch2/hes1信号通路可能是庆大霉素诱导耳肾损伤及修复过程中的重要角色之一。DAPT和肾气丸可能通过抑制Jag2/Notch2/ hes1信号通路，减轻肾间质小管上皮细胞和耳蜗毛细胞的损伤，并促进肾间质小管上皮细胞和耳蜗毛细胞的修复。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分 Jag2／Notch2／hes1信号通路在庆大霉素诱导耳肾损伤大鼠模型中耳肾的表达

材料和方法

结果

讨论

结论

第二部分 γ-分泌酶抑制剂DAPT对Notch2／HES1信号通路在庆大霉素诱导耳肾损伤大鼠模型中耳肾的表达的影响

材料和方法

结果

讨论

结论

第三部分 金匮肾气丸对Notch2／HES1信号通路在庆大霉素诱导耳肾损伤大鼠模型中耳肾的表达的影响

材料和方法

结果

讨论

结论

结语

参考文献

综述

附图

读博期间发表论文及论著情况

致谢