慢加急(亚急)性乙型肝炎肝衰竭湿热证与慢性乙型肝炎湿热证代谢组学比较研究

摘要

目的: 运用代谢组学研究方法，分析慢加急（亚急）性乙肝肝衰竭湿热证和慢乙肝湿热证患者的血清代谢产物，从小分子代谢物水平比较慢加急（亚急）性乙肝肝衰竭湿热证和慢乙肝湿热证的生物标志物，为慢加急（亚急）性乙肝肝衰竭湿热证和慢乙肝湿热证的临床诊断、鉴别诊断和治疗提供现代科学依据。 方法: 选取慢加急（亚急）性乙肝肝衰竭湿热证患者20例、慢性乙型病毒性肝炎湿热证患者20例分别作为实验观察组，选择20例健康志愿者作为正常对照组。收集各组静脉血，制备样品。应用基于超高效液相色谱联合四级杆飞行时间质谱技术的代谢组学方法，对各组血液样品进行代谢产物检测，使用Masslynx软件包，自动完成谱峰识别、滤噪等前处理程序，将上述数据矩阵导入多元统计分析软件(SIMCA13.0)，经Pareto标度化预处理，首先进行主成分(PCA)分析，对数据进行无监督的模式识别，在PCA分析的基础上，采用正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)进行有监督的模式识别，获取得分图(Score plot)和载荷图(S-plot)，结合各变量的VIP值，作为差异标志物的筛选标准，分别获得各观察组与正常组对比后的样品分类信息和差异变量，在与代谢产物数据库HMDB进行对比后，最终鉴定出其特征代谢物，然后比较研究各观察组的代谢物质。 结果: 经过初步分析，研究显示:表征肝衰竭湿热证的潜在生物标志物有19个，表征慢乙肝湿热证的潜在生物标志物有18个，通过比较研究这两组生物标志物可知，肝衰竭湿热证和慢乙肝湿热证有4类15个共有标志物:氨基酸类、胆汁酸类、肉毒碱类和溶血卵磷脂类，特异性表征肝衰竭湿热证的标志物有4个，分别为L-2-氨基-3-亚甲基-己酸、泮托拉唑、月桂酸二乙醇酰胺、溶血卵磷脂(18∶1)，特异性表征慢乙肝湿热证的标志物有3个，分别为吲哚丙烯酸、牛磺胆酸钠、溶血卵磷脂(16∶1)。 结论: 本研究在基于UPLC/MS代谢组学研究技术的基础上，分析了慢加急（亚急）性乙肝肝衰竭湿热证组、慢乙肝湿热证组和正常对照组的血清代谢物，研究比较了慢加急（亚急）性乙肝肝衰竭湿热证和慢乙肝湿热证的生物标志物，两组生物标志物相同的为4类15种，不同的分别为4种和3种，说明中医证型相同的两种肝病具有共同的代谢特征，为肝病异病同治提供了实验依据，同时也提示不同疾病同一证型也存在某些差异，这一研究结果有助于阐释目前中医“辨证与辨病相结合”的科学内涵。

目录

声明

摘要

英文词缩略表

前言

参考文献

理论研究

1．慢性乙型病毒性肝炎

2．肝功能衰竭

3．慢乙肝、肝衰竭中医病因病机

4．代谢组学

4．1 代谢组学的概念

4．2 代谢组学研究的历史回顾

4．3 代谢组学研究的优势

4．4 代谢组学主要分析技术

4．5 代谢组学在湿热证研究中的应用

临床研究

1．资料

1．1 研究对象资料

1．2 诊断标准

1．3 纳入标准

1．4 排除标准

1．5 分组及各组条件

1．6 病例剔除和脱落标准

2．方法

2．1 观察指标

2．2 试剂与仪器

2．3 血液标本的采集和预处理

2．4 血液的代谢组学分析

2．5 一般资料、生化及生物学指标数据处理方法

3．结果

3．1 一般资料

3．2 临床血液生化指标比较

3．3 血液代谢组学分析结果

4．讨论

5．结语

参考文献

附录 综述 湿热证理论的初步研究

致谢