人中黄的质量控制及其体外抑菌、抗流感病毒(H1N1)的研究

摘要

人中黄为甘草（Glycyrrhiza uralensisFisch）的特殊炮制品，其性味甘、咸、寒，具有清热凉血、泻火解毒的功效。目前国内外对甘草的物质基础研究报道比较多，而有关人中黄的研究报道则甚少。人中黄属于清热解毒类药物，该类药物一般具有抑菌、抗炎、抗病毒等药理作用。古籍文献中常有人中黄治疗瘟疫的记载，且效果显著。由于人中黄独特的炮制加工方法，在现代，人们出于对药物安全和卫生方面的考虑，人中黄有逐渐被淘汰的趋势。为了挖掘中医药伟大的宝库，去粗取精，有必要对人中黄进行较系统的研究。本文建立了人中黄的质量标准，对人中黄进行了药材性状、鉴别、检查、指纹图谱和含量测定研究，同时对其体外抑菌、抗流感病毒进行了初步研究。
　　采用显微鉴别法观察了人中黄的粉末显微特征，发现人中黄的粉末显微特征与甘草的显微特征相似，并检出2批掺伪药材；采用薄层色谱法，以甘草苷、甘草酸、甘草素为对照物，建立的TLC鉴别方法结果理想。按照水分测定法(《中国药典》2015年版四部通则0832第二法(烘干法))测定了10批人中黄药材的水分，结果显示，人中黄样品水分均不超过
　　9.0％。对人中黄微生物限度检查方法进行了验证，并参照控制菌检查法（《中国药典》2015版四部通则1106）实验，结果3批人中黄中均未检查出大肠埃希菌和耐胆盐格兰阴性菌。
　　参照CFDA颁布《中药注射剂指纹图谱的技术要求(暂行)》的规定，采用HPLC法建立了人中黄的指纹图谱，标定了17个共有峰，共有峰均在90min内出现，各色谱峰分离度较好，结果显示其中10批样品与对照图谱相比，相似度均达到0.9，另检出2批市售品与对照图谱差异明显，显微鉴别证明为掺伪品，两种方法鉴别的结果相吻合。
　　采用HPLC法，以甘草苷、甘草素及甘草酸为指标成分，建立了人中黄含量测定方法。结果：各色谱峰分离情况良好，甘草苷、甘草素和甘草酸在各自的浓度范围内均有良好的线性关系；加样回收率在97.49%-103.24%之间，其RSD为0.58%-1.24%之间。结论：所建方法准确、简便、重现性好，可用于人中黄中甘草苷、甘草素和甘草酸的定量考察。
　　采用用纸片扩散法和二倍稀释法，发现人中黄及甘草对大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有一定的抑制作用。人中黄和甘草均对金黄色葡萄球菌有较显著的抑菌和杀菌效果,MIC均为0.016g/ml, MBC均为0.031g/ml，对绿脓杆菌和大肠杆菌抑制作用较弱。此外，人中黄对白色念珠菌的MIC为0.250g/ml，甘草对白色念珠菌的MIC大于0.500g/ml，表明人中黄抑制白色念珠菌作用强于甘草。
　　采用MTT法对人中黄及其不同极性提取物的体外抗H1N1流感病毒的活性进行了初步研究。结果显示，人中黄总提取物、甘草总提取物、正丁醇部位、水部位和利巴韦林组（阳性对照组）均有抗流感病毒生物合成作用，其治疗指数(TI)分别为5.16±0.24、2.41±0.11、7.54±0.38、49.52±2.31、6.88±0.36；其中水部位抗病毒生物合成作用最强，甘草总部位抗生物合成作用最弱，且水部位和正丁醇部位的抗病毒生物合成作用均强于利巴韦林组；正丁醇部位直接具有杀灭病毒的作用，治疗指数(TI)为3.34±0.37，且利巴韦林组对病毒的直接杀灭作用与正丁醇组无显著性差别，治疗指数（TI）为3.91±0.34，而人中黄总提取物、甘草总提取物、水部位对病毒无直接杀灭作用；人中黄不同提取物、甘草总提取物和利巴韦林组的不同浓度组均出现典型流感病毒所致的病变效应，与病毒对照组无显著差别，说明各药物均无阻断病毒吸附作用。

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缩略词表

前言

第一章 人中黄质量控制研究

1.仪器与试药

2.性状

3.鉴别

4.检查

5.指纹图谱研究

6.人中黄中甘草苷、甘草素、甘草酸的含量测定

7.讨论

第二章 人中黄体外抑菌实验

1实验材料

2实验方法

3.结果

3.讨论

第三章 人中黄体外抗流感病毒研究

1实验材料

2实验方法

3结果

4.讨论

结语与创新

综述：人中黄研究综述及清热解毒药的药理作用

参考文献

已发表论文

致谢