利用RNAi技术研究植物无融合生殖相关基因

摘要

本文介绍了RNA干涉(RNAi)是一种新近出现强有力的研究基因功能的技术，通过降解细胞或组织中特定的靶mRNA来沉默或降低编码蛋白质的表达，从GenBank上发表的拟南芥FIEcDNA序列中寻找保守区域，设计了4对29nt寡核苷酸序列，体外转录合成4种用于干涉的siRNA，以通过RT-PCR法扩增的甜菜M14FIE基因的特异片段为探针，分别和甜菜M14花蕾总RNA进行Northern杂交，根据杂交信号检测干涉是否发生作用。同时根据已发表的不同植物FIE基因序列的高度同源区，设计一对引物，以甜菜M14花蕾总RNA为模板进行RT-PCR扩增甜菜M14FIE特异片段。根据RT-PCR产物数量的多少检测干涉是否发生作用。

目录

文摘

英文文摘

第1章引言

1.1RNA干涉及其研究进展

1.2植物无融合生殖研究进展

第2章材料与方法

2.1实验材料

2.2甜菜M14 FIE基因siRNA的合成

2.3 siRNA干涉甜菜M14品系FIE基因的植株处理

2.4 RNAi后的甜菜M14花蕾总RNA的分离与纯化

2.5甜菜M14品系FIE基因探针制备

2.6 Northern杂交检测RNAi后甜菜M14FIE基因表达情况

2.7 RNAi处理后的甜菜M14特异片段的克隆

第3章结果

3.1体外转录合成甜菜M14 FIE基因siRNA

3.2 RNAi后的甜菜M14花蕾总RNA提取

3.3 pGEM-T-FIE质粒DNA提取

3.4 pGEM-T-FIE质粒DNA酶切鉴定

3.5聚合酶链式反应(PCR)扩增FIE特异片段

3.6 siRNA处理后的甜菜M14花蕾总RNA变性胶电泳

3.7 DIG标记甜菜M14FIE基因探针效率检测

3.8 Northern杂交检测RNAi后甜菜M14FIE基因表达情况结果

3.9 RNAi处理后的M14花蕾总RNA的逆转录

3.10 RT-PCR扩增FIE特异片段

第4章讨论

4.1甜菜M14 FIE基因siRNA的设计与合成

4.2 Northern杂交检测RNAi后的甜菜M14FIE基因表达

4.3 RT-PCR法与Northern杂交法对RNA干涉结果检测的讨论

4.4关于后续工作

第5章结论

攻读学位期间发表论文

致 谢

参考文献

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