西藏林芝地区优良野生黑木耳菌种的选育

摘要

西藏林芝地区位于雅鲁藏布江中下游，平均海拔3100m以上，是我国第三大林区。由于近年来我国实行天然林保护工程，使当地依靠采伐林木的传统经济受到严重冲击。但为当地发展经济，增加农牧民收入，在大力保护森林资源的前提下，开发林下产业无疑是最好的选择。林芝地区的农牧民很早就有椴木栽培黑木耳的经验，但椴木栽培对资源浪费大，产量低，经济效益不明显。为改变当地的传统栽培观念和大力发展现代黑木耳产业的需求，本文主要从黑木耳栽培技术的优化，优良菌种的筛选和分子鉴定这三个方面进行了研究。
　　 在对黑木耳栽培技术优化的研究中，首先对高海拔地区黑木耳栽培种的培养基组分进行了优化，得到青冈木屑78％、麸皮22％、石灰1％、石膏1％,含水量62％的最佳培养基组分和20℃的最佳培养温度。确定了高原灭菌的最佳灭菌时间为9h以及在栽培管理阶段的最适下地时间在4月上旬，同时确定了最佳口形“/”、最佳口数140个的划口组合。
　　 适合高原栽培优良菌株的筛选试验中，对在林芝地区不同地点采集到的10株优良野生菌株，进行分离纯化和细胞亲和性试验，得到8株独立菌株，并对8个菌株进行逐级扩培和出耳栽培试验，通过对各级菌种的长势、长速以及栽培种子实体的商品性能等指标进行了比较分析，最终确定西藏6号和西藏7号为最优菌株。
　　 在对优良菌株的鉴定中，采用了ITS序列分析法，对得到的优良菌株西藏6号、西藏7号进行分子鉴定。使用CTAB法提取了两个菌株的基因组。使用真菌ITS通用引物进行PCR扩增并成功克隆其ITS序列。通过与NCBI nr数据库的在线比对，并使用MEGA5.0绘制NJ分子进化树。结果表明西藏6号、西藏7号均为木耳属黑木耳种。
　　 本文优化得到了一种适合林芝地区的黑木耳栽培方法，并运用该方法筛选得到了2株适合林芝地区栽培的黑木耳菌种并通过分子鉴定确定为黑木耳种。本项目的完成，对发展林芝地区黑木耳产业，增加当地农牧民收入，不断满足国内外市场需求，具有重大的现实意义。

目录

摘要

第1章 前言

1．1 黑木耳生物学特性

1．1．1 名称及分类地位

1．1．2 形态结构

1．1．3 生活史

1．1．4 黑木耳生长所需的条件

1．2 黑木耳的价值

1．2．1 食用价值

1．2．2 药用价值

1．2．3 经济价值

1．3 黑木耳人工栽培的历史及现状

1．4 黑木耳菌种选育的概况

1．4．1 人工选择育种

1．4．2 杂交育种

1．4．3 诱变育种

1．4．4 原生质体融合育种

1．4．5 基因工程育种

1．5 黑木耳菌种鉴定的概况

1．5．1 经典鉴定方法

1．5．2 分子生物学鉴定方法

1．6 本课题研究的目的和意义

第2章 西藏林芝地区黑木耳栽培技术的优化

2．1 试验材料

2．1．1 供试菌株

2．1．2 试验仪器

2．1．3 试验地概况

2．2 试验设计

2．2．1 高原袋料地栽黑木耳培养基配方的优化

2．2．2 运用简易灭菌锅高原灭菌时间的选择

2．2．3 菌丝体培育阶段最适温度的选择

2．2．4 最适栽培时间的选择

2．2．5 划口数量和划口形状与黑木耳产量和商品性能的关系

2．3 试验过程

2．3．1 栽培菌种的制备

2．3．2 田间管理

2．4 结果与分析

2．4．1 培养基优化结果

2．4．2 不同灭菌时间菌袋染菌率对比分析

2．4．3 不同养菌温度对栽培种污染和产量的影响

2．4．5 不同栽培时间菌袋染菌率对比分析

2．4．6 不同划口形状和不同划口数量对产量和商品性能影响

2．5 本章小结

第3章 适合林芝地区栽培的黑木耳菌种筛选

3．1 试验材料

3．1．1 培养基配方

3．1．2 试验菌株

3．1．3 实验仪器与设备

3．2 试验方法

3．2．1 PDA培养基的配置

3．2．2 野生菌株的分离及纯化

3．2．3 拮抗试验

3．2．4 菌丝长势、长速对比试验

3．2．5 栽培出耳试验

3．2．6 示范推广

3．3 结果与分析

3．3．1 各优良野生菌株拮抗反应分析

3．3．2 在各级培养基上生长情况比较分析

3．3．3 各菌株在三级培养基上长速比较

3．3．4 出耳产量比较分析

3．3．5 子实体商品性能比较分析

3．3．6 示范栽培结果分析

3．4 本章小结

第4章 优良菌株的分子鉴定

4．1 试验材料

4．1．1 试验所需仪器

4．1．2 供试菌株

4．1．3 试验所需试剂

4．2 试验方法

4．2．1 基因组DNA的提取

4．2．2 目的片段扩增与纯化

4．3 结果与分析

4．3．1 西藏6号和西藏7号菌株基因组DNA提取

4．3．2 西藏6号和西藏7号菌株扩增结果

4．3．3 西藏6号和西藏7号菌株扩增后阳性克隆子的筛选

4．3．4 生物信息学分析结果

4．4 本章小结

第5章 林芝地区袋料地栽黑木耳的推广与效益分析

5．1 举办培训班大力推广高原袋料地栽黑木耳技术

5．2 项目实施与成果推广

5．3 总体成效

5．3．1 经济效益

5．3．2 社会效益

5．3．3 生态效益

第6章 讨论

6．1 西藏林芝地区黑木耳栽培技术的优化

6．2 适合林芝地区栽培的黑木耳菌种筛选

6．3 优良野生菌株的分子鉴定

第7章 结论

参考文献

致谢

攻读学位期间发表的学术论文

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