玉米花粉抗辐射有效组分筛选及组成分析

摘要

玉米花粉作为一种东北地区产量丰富的药食同源性产品,富含多种具有辐射防护作用的活性成分,具有重要的科学研究和实际应用价值。本研究以玉米花粉作为主要研究对象,采用不同分离手段对其多糖、黄酮类组分及总水提取物进行提取分离纯化,结合体外抗氧化实验及体内辐射防护动物实验,筛选出具有最佳辐射防护功能的玉米花粉分离组分,并初步研究此组分的成分组成,取得如下研究成果:
　　(1)采用水提醇沉法提取分离花粉多糖;超声辅助提取-AB-8大孔树脂纯化方法分离花粉黄酮;热水浸提-超声辅助提取法提取花粉总水提物。玉米花粉多糖、黄酮类及总水提取物组分产率依次为1.14％、0.075%、47.3%。
　　(2)采用还原力、羟基自由基及ABTS自由基清除体系,测定玉米花粉不同分离组分的体外抗氧化能力,发现玉米花粉三种提取物均具有一定的体外抗氧化能力,综合分析及比较,体外抗氧化能力较强的组分为FMP即玉米花粉黄酮分离组分。
　　(3)玉米花粉三种分离组分辐射防护作用实验表明:三种分离组分对γ射线引起的小鼠免疫系统损伤及机体组织氧化损伤具有一定的防护和抑制作用。玉米花粉分离组分能够提高辐照小鼠肝脾指数及外周血白细胞数,减轻辐射引起的免疫损伤同时可降低辐射引起的氧化损伤,提高机体SOD、GSH-Px活力,降低组织中MDA含量,抑制脂质过氧化反应进行。综合分析及比较,玉米花粉黄酮组分的辐射防护作用最佳,多糖组分次之。
　　(4)对辐射防护实验中小鼠脾脏蛋白质进行2-DE蛋白组学分析,结果表明,与空白对照组性比,辐照对照组2倍上调蛋白点数为5个,2倍下调点蛋白点数为34个;相对于辐照对照组,黄酮给药组中2倍上调蛋白点有17个,2倍下调的蛋白点有21个。从中分别选取四个差异点(1901,3302,5001及6101)进行MALDI-TOF-MS分析,发现其分别为β-90KDa热休克蛋(Grp94)、蛋白质二硫键异构酶相关蛋白6、β肌动蛋白(aa27-375)或A-X肌动蛋白及γ-肌动蛋白。
　　(5)通过颜色反应、荧光反应分析及HPLC/MS检测初步推断玉米花粉黄酮组分中主要含有槲皮素、山奈酚、异鼠李素、槲皮素-3-O-葡糖糖苷、异鼠李素-3-O-葡糖糖苷、槲皮素-3,3’-O-二葡萄糖苷及槲皮素-3,7-O-二葡萄糖苷等七种黄酮及黄酮苷类化合物。

目录

玉米花粉抗辐射有效组分筛选及组成分析

ANTI-RADIATION CONSTITUENTS SELECTION AND ANALYSIS IN MAIZE POLLEN

摘 要

Abstract

第1章 绪 论

1.1 立题背景及研究意义

1.2 辐射防护作用研究概述

1.3 花粉的研究及应用现状

1.4 多糖研究概述

1.5 黄酮类化合物研究概述

1.6 玉米花粉的研究现状

1.7 本课题主要研究内容

1.8 本课题主要创新点

第2章 材料与方法

2.1 实验材料与试剂

2.2 实验仪器及设备

2.3 总糖、蛋白质、总黄酮化合物含量测定方法

2.4 玉米花粉抗辐射有效组分的提取及纯化

2.5 玉米花粉抗辐射有效组分体外抗氧化作用研究

2.6 玉米花粉各组分抗辐射功能研究

2.7 脾脏组织蛋白质组学研究

2.8 玉米花粉黄酮组分的成分分析

第3章 玉米花粉抗辐射有效组分的提取及纯化

3.1 葡萄糖标准曲线

3.2 总黄酮标准曲线

3.3 玉米花粉抗辐射有效组分的提取、分离结果

3.4 含量测定结果

3.5 本章小结

第4章 玉米花粉抗辐射有效组分体外抗氧化作用

4.1 总还原力的测定

4.2 羟基自由基清除率的测定

4.3 ABTS自由基清除率的测定

4.4 本章小结

第5章 玉米花粉抗辐射有效组分体内抗辐射作用

5.1玉米花粉分离组分对辐射小鼠肝脾指数的影响

5.2 玉米花粉分离组分对辐射小鼠外周血白细胞数的影响

5.3 玉米花粉分离组分对辐射小鼠组织SOD活力的影响

5.4 玉米花粉分离组分对辐射小鼠组织GSH-Px活力的影响

5.5 玉米花粉分离组分对辐射小鼠组织MDA含量的影响

5.6 本章小结

第6章 辐照致小鼠脾脏损伤蛋白质组学研究

6.1 小鼠脾脏蛋白质双向电泳图谱建立

6.2 小鼠脾脏蛋白质双向电泳图谱分析

6.3 差异蛋白质谱分析

6.4 本章小结

第7章 玉米花粉黄酮组分的成分分析

7.1 玉米花粉黄酮组分颜色反应

7.2 玉米花粉黄酮组分荧光反应

7.3 玉米花粉黄酮组分的液质联用分析

7.4 本章小结

结 论

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的论文及其它成果

哈尔滨工业大学学位论文原创性声明及使用授权说明

致 谢

个人简历