DSA-FACE技术分析胰腺癌组织特异N-糖链的研究

摘要

胰腺癌是一种恶性程度极高的消化道肿瘤,常用的治疗方法包括手术切除、放疗、化疗和分子靶向治疗。其中,分子靶向治疗为新兴的治疗手段,但是目前缺乏明确的胰腺癌治疗靶点和有效的治疗手段。DSA-FACE技术具有高效、快速、高通量等优点,成为目前糖生物学研究领域中重要的技术方法。目前,国际上通常将DSA-FACE技术应用于血清层面的研究,在组织层面的研究还未见报道。
　　本实验将DSA-FACE技术进行改进、优化,成功建立了一种可用于检测胰腺癌组织细胞表面N-糖链的高通量分析技术。在此基础上,通过检测、分析41对胰腺癌组织细胞表面N-糖链,发现与癌旁组相比,癌症组中峰10,峰13含量显著升高;峰32,峰40含量显著降低。此外,对癌症组与癌旁组之间不同年龄、性别以及病理分期之间的比较,发现峰10与年龄因素有关,在年龄大于60岁胰腺癌患者的癌症组织中含量明显升高;峰32,峰40与性别因素有关,在男性患者体内高表达,并且发生胰腺癌时该糖峰在男性患者体内含量急剧下降;峰13在癌症组与癌旁组之间含量的差异不受年龄和性别因素的影响;此外,在分期研究中,发现峰10,峰13,峰32和峰40在胰腺癌Ⅱ期中存在显著差异。最后,用外切糖苷酶实验初步解析部分N-糖链结构发现,峰32是带有α-1,6-岩藻糖和β-1,4-半乳糖修饰的结构。峰40是带有α-1,6-岩藻糖基化修饰的结构。
　　本研究建立了一种可用于检测胰腺癌组织细胞表面N-糖链的技术,为糖生物学的进一步发展提供了可靠的技术平台。在此基础上我们分析了胰腺癌组织特异N-糖链,并对不同年龄、性别及病理分期的N-糖链进行了研究,该结果将为胰腺癌分子靶向治疗提供潜在的治疗靶点,也为胰腺癌的个性化治疗提供了数据和理论支持。

目录

摘 要

Abstract

第1章 绪 论

1.1 课题来源

1.2 胰腺癌的研究现状

1.2.1 胰腺癌简介

1.2.2 胰腺癌的研究现状

1.3 糖生物学与肿瘤

1.3.1 糖生物学简介

1.3.2 肿瘤与糖链异常

1.4 糖链结构研究方法

1.4.1 蛋白糖链的获得

1.4.2 层析技术

1.4.3 生物质谱技术

1.4.4 凝集素技术

1.4.5 芯片技术

1.4.6 生物信息学技术

1.4.7 DSA-FACE技术

1.5 本研究的目的及意义

第2章 实验材料和方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

2.2.1 提取胰腺癌组织细胞表面膜蛋白

2.2.2水解糖链

2.2.3 切除唾液酸

2.2.4 APTS荧光标记

2.2.5 Sephadex G10纯化与真空抽干

2.2.6 溶解样品及DNA测序仪毛细管电泳检样

2.2.7 糖峰和原始数据的确立及提取

2.2.8 统计学处理方法

第3章 胰腺癌组织细胞表面N-糖链图谱分析

3.1 引言

3.2 胰腺癌组织N-糖链图谱的获得

3.2.1 实验材料的选择

3.2.2 胰腺癌组织细胞表面N-糖链检测方法的建立

3.2.3 胰腺癌组织细胞表面N-糖链谱图的获得

3.3 胰腺癌组织细胞表面N-糖链图谱的分析

3.3.1 胰腺癌组织N-糖链电泳谱图数据分析

3.3.2 胰腺癌与癌旁组织非共有峰的统计学分析

3.4 讨论

3.5 本章小结

第4章 不同分组之间N-糖链的差异比较分析及糖链结构初步解析

4.1 引言

4.2 不同年龄段患者的胰腺癌与癌旁组织之间N-糖链的差异比较

4.3 不同性别患者的胰腺癌与癌旁组织之间N-糖链的差异比较

4.4 不同病理分期患者的胰腺癌与癌旁组织之间N-糖链的差异比较

4.5 糖峰结构的初步解析

4.6讨论

4.7 本章小结

结 论

参考文献

附录

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致 谢