角毛壳葡聚糖酶基因的克隆和在毕赤酵母中的表达

摘要

中国是个农业大国,农药的用量巨大,且以化学农药为主。化学农药的长期使用会造成一系列的环境问题和食品安全问题,如易诱发抗药性,易产生剂量依赖,专一性差而破坏生态结构等。随着环保意识的提高,生物农药为此提供了行之有效而且绿色环保的解决方向。
　　毛壳菌(Chaetomiumspp)是一类具有生防能力的真菌,可以用来做微生物源生物农药。它可产生降解植物病原真菌的细胞壁的几丁质酶和葡聚糖酶,结合其它一些机制来有效抑制植物病原真菌生长。
　　本研究旨在找到角毛壳菌的葡聚糖酶基因序列并测定其蛋白对植物病原菌的防治能力。
　　从角毛壳菌基因组中克隆到葡聚糖酶基因cgc,全长1709bp,其中83bp-267bp是内含子序列。生物信息学方法分析表明此基因序列共编码541个氨基酸,前19氨基酸是信号肽序列,理论大小为55.6kDa。通过构建重组质粒pPIC9K-cgc,电转化毕赤酵母GS115菌株中,筛选后得到4个Mut+阳性转化子。诱导表达后得到目的蛋白在60kDa与100kDa之间。角毛壳重组葡聚糖酶蛋白最适温度约45℃,最适pH5.0,粗酶液酶活0.1283U,50％浓度下,对尖孢镰刀菌孢子萌发的抑制率为11.8%,在植物病原菌生物防治研究上具有潜在的理论和实践上的意义。

目录

角毛壳葡聚糖酶基因的克隆和在毕赤酵母中的表达

CLONING OF GLUCANASE GENE FROM Chaetomium cupreum and ITS EXPRESSION IN Pichia pastoris

摘 要

Abstract

第1章 绪论

1.1 课题来源

1.2 研究目的和意义

1.3 课题相关研究的背景及成果的发展概况

1.4 技术路线图

第2章 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.2 实验方法

第3章 实验结果

3.1 角毛壳葡聚糖酶基因的获得

3.2 生物信息学分析

3.3 重组质粒pPIC9K-cgc的构建

3.4 重组质粒电转化毕赤酵母GS115及转化子的筛选

3.5 转化子的诱导表达及粗酶液的制备

3.6 重组蛋白酶CGC的酶学性质测定

3.7 重组蛋白酶CGC对孢子萌发率的影响

3.8 本章小结

结 论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

哈尔滨工业大学学位论文原创性声明及使用授权说明

致 谢