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MEG8-DMR对人肝癌Huh7细胞生物学行为的影响
THE EFFECT OF MEG8-DMRON BIOLOGICAL PROPERTIES OFHUH7 CELL
摘 要
Abstract
目 录
第1章 绪 论
1.1课题来源及研究的目的和意义
1.2 基因组印记概述
1.3 差异甲基化区域的调控
1.3.1 DNA甲基化简介
1.3.2 差异甲基化区域的生物学作用
1.4 DLK1-DIO3印记区域介绍
1.4.1 DLK1-DIO3印记区域概述
1.4.2 DLK1-DIO3印记区域主要元件与肿瘤发生的分析
1.4.3已知差异甲基化区域的研究
1.5 MEG8-DMR的相关研究
1.5.1 MEG8-DMR的生物信息学分析
1.5.2 MEG8-DMR附近的插入突变与肝癌发生
1.5.3 MEG8-DMR关于胚胎发育的研究进展
1.6 CRISPR/Cas9技术的研究现状
1.6.1 CRISPR/Cas9基因编辑技术介绍
1.6.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术应用
1.7 本研究内容及技术路线
1.7.1 本研究主要研究内容
1.7.2 本研究技术路线
第2章 实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验细胞系
2.1.2 实验菌株与载体
2.1.3 实验主要试剂
2.1.4主要实验仪器
2.1.5 生物信息学网站及数据分析所用软件
2.2 实验方法
2.2.1 Cas9敲除载体的构建
2.2.2 细胞水平实验
2.2.3 基因组DNA的提取
2.2.4基因组总RNA的提取及反转录
2.2.5 实时荧光定量PCR
2.2.6 细胞增殖及克隆形成
2.2.7 细胞划痕与侵袭
2.2.8 细胞周期
2.2.9 细胞凋亡
2.2.10 统计学分析
第3章 MEG8-DMR对基因表达的调控
3.1 引言
3.2 构建Cas9-MEG8-DMR重组载体
3.2.1 sgRNA和检测引物的设计
3.2.2 构建Cas9-MEG8-DMR重组载体
3.3 在Huh7细胞中敲除MEG8-DMR
3.4 MEG8-DMR与相关基因的表达调控
3.4.1 MEG8-DMR对父本表达基因表达水平的影响
3.4.2 MEG8-DMR对母本表达基因表达水平的影响
3.4.3 MEG8-DMR对miR-370表达水平的影响
3.5 讨论
3.6 本章小结
第4章 MEG8-DMR对Huh7细胞生物学行为的影响
4.1 引言
4.2 MEG8-DMR对Huh7细胞形态的影响
4.3 MEG8-DMR对Huh7细胞增殖和克隆形成能力的影响
4.4 MEG8-DMR对Huh7细胞迁移和侵袭能力的影响
4.5 MEG8-DMR对Huh7细胞周期的影响
4.6 MEG8-DMR对Huh7细胞凋亡能力的影响
4.7 讨论
4.8 本章小结
结 论
参考文献
附录一
附录二
哈尔滨工业大学学位论文原创性声明和使用权限学位论文原创性声明
致 谢
