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【6h】

农杆菌介导几丁质酶基因转化大豆子叶节主要影响因素的研究

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目录

摘 要

Abstract

1.前言

1.1研究的目的及意义

1.2文献综述

1.2.1几丁质酶基因与植物抗病基因工程

1.2.2大豆再生体系的建立与完善

1.2.3大豆遗传转化的研究进展

1.3展望

2.材料与方法

2.1供试材料

2.1.1植物材料

2.1.2外植体

2.1.3农杆菌菌株

2.1.4 PCR检测材料

2.2方法

2.2.1外植体获得

2.2.2大豆子叶节高效再生体系的建立

2.2.3选择压的确定

2.2.4除菌剂及其浓度的确定

2.2.5农杆菌介导大豆子叶节的遗传转化

2.2.6 PCR检测

2.2.7数据统计分析方法

3.结果与分析

3.1大豆子叶节高效再生体系的建立

3.1.1大豆不同基因型子叶节丛生芽分化的差异

3.1.2不同的BA浓度对子叶节丛生芽分化的影响

3.1.3外植体大小对子叶节丛生芽分化的影响

3.1.4生根培养基筛选

3.2选择压的确定

3.2.1新霉素(Neo)筛选浓度的确定

3.2.2卡那霉素(Km)的筛选浓度的确定

3.3除菌剂及其浓度确定

3.3.1头孢唑啉钠(Cef)对大豆子叶节丛生芽分化的影响

3.3.2头孢唑啉钠(Cef)对大豆子叶节丛生芽生根的影响

3.4农杆菌介导遗传转化

3.4.1 LBA4404和EHA105生长曲线的测定

3.4.2遗传转化时超声波辅助处理时间范围的确定

3.4.3不同外植体基因型对遗传转化的影响

3.4.4不同菌株对遗传转化的影响

3.4.5农杆菌介导遗传转化的四个重要影响因素的正交实验

3.5转化体的PCR检测

4.讨论

5.结论

6.致谢

参考文献

附录1

附录2

附录3

附录4

图 版

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摘要

该研究以10个东北主栽大豆品种(系)的子叶节为受体材料,研究了大豆子叶节高效再生体系的建立,以及农杆菌介导法遗传转化的影响因素.建立了稳定的遗传转化体系,获得7株PCR检测呈阳性植株.初步证实菜豆几丁质酶基因已经整合到大豆基因组中.

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