几丁质酶基因对黄瓜遗传转化的研究

摘要

黄瓜是人们喜食的蔬菜作物之一,在中国蔬菜周年供应上占有重要地位,但易受多种真菌病害的危害而使产量降低,品质下降.传统的育种方法周期长、耗资大、效率低、受抗性基因资源匮乏的限制、还易出现抗性退化的现象,用现有品种资源进行有性杂交育种很难尽快得到具有抗性的优良品种.因此,该研究通过基因工程手段,利用农杆菌介导法将菜豆几丁质酶基因导入黄瓜,建立了黄瓜高效的植株再生体系和遗传转化体系,探讨了影响植株再生频率和遗传转化效率的主要因素,确立了最佳的植株再生和遗传转化条件,获得了阳性转基因植株.主要研究结果如下:1 外植体和6-BA浓度对器官发生的影响 子叶节是最佳的外植体;最适宜的芽诱导培养基为MS+6-BA0.5mg/L.2 黄瓜遗传转化的最适宜条件 子叶节预培养1~2天,在含有6-BA0.5mg/L、乙酰丁香酮(AS)100μmol/L、pH5.2的MS培养基上进行培养,遗传转化效率最高.最佳的选择压力为卡那霉素30mg/L.3 转基因植株的检测 用几丁质酶两端序列合成的引物对To代再生植株进行PCR检测,结果

目录

文摘

英文文摘

1前言

1.1研究目的和意义

1.2文献综述

1.2.1植物遗传转化方法

1.2.2植物抗真菌基因工程研究进展

1.2.3植物几丁质酶基因及其在抗真菌酶基因工程中的应用

1.2.4黄瓜组织培养研究进展

1.2.5黄瓜遗传转化研究进展

2材料与方法

2.1黄瓜高频再生体系建立

2.1.1试验材料

2.1.2试验方法

2.2黄瓜遗传转化体系建立

2.2.1试验材料

2.2.2试验方法

2.3转基因植株的检测

2.3.1试验材料

2.3.2试验方法

2.4统计分析方法

3结果与分析

3.1黄瓜再生体系建立

3.1.1影响黄瓜再生频率的因素

3.1.2植株再生

3.2黄瓜遗传转化体系建立

3.2.1卡那霉素筛选浓度确定

3.2.2影响遗传转化主要因素探讨

3.2.3植株再生

3.3转化当代(To)再生植株的检测

4讨论

4.1再生途径探讨

4.2影响遗传转化效率主要因素探讨

5结论

5.1组织培养

5.2遗传转化

5.3 PCR检测

参考文献

致谢