番茄抗黄化曲叶病基因Ty--2的分子标记及种质资源鉴定

摘要

番茄是世界重要的蔬菜作物之一，也是我国的主栽蔬菜作物。在我国，番茄的种植面积逐年扩大，然而伴随着产量的不断提高，番茄的病害也日益严重，其中，番茄黄化曲叶病已经成为为害番茄的重要病害之一。目前，在我国，番茄黄化曲叶病呈现由南向北逐渐蔓延的趋势，这使得我国部分番茄主要产区面临果实大面积减产甚至绝产的危险。对于该病害的防治，目前没有特别有效的方法或药剂，因此，面对日益严重的病害，筛选抗病材料，进行抗病育种成为当前工作的重中之重。 本试验通过分子标记技术，在基因水平上研究抗番茄黄化曲叶病的抗病材料，构建抗病、感病群体，建立分子标记体系，充分发挥分子标记在番茄抗病育种中的作用，利用各世代材料筛选出与抗番茄黄化曲叶病毒Ty-2基因向连锁的标记，为番茄抗黄化曲叶病育种及新品种的选育工作提供理论依据和材料支撑。 本试验的主要研究结果: 1、试验材料采用4世代法进行。以抗番茄黄化曲叶病材料‘CLN2498D’为父本，感病材料‘早粉2号’为母本，得到杂交F1代，F1代自交获得F2代，通过烟粉虱接种病毒，建立抗、感群体，并对各世代番茄材料进行抗病性鉴定。鉴定结果表明:F1代均表现为抗病;F2代抗、感比例为3.09∶1，基本符合3∶1的分离比率，经x2检验，符合单基因显性遗传规律。 2、以父本、母本、F1代及F2代为研究对象，采用AFLP及SSR两种标记方法，筛选与Ty-2基因连锁的标记。通过对256对AFLP引物及30对SSR引物的筛选，共获得5个AFLP标记和2个SSR标记与Ty-2基因连锁，其中标记E02M11距离目标基因5.8cM，另有3个标记距离均在10cM以内。 3、将标记E02M11用于30份番茄材料的种质资源筛选，获得12个含有该标记的番茄材料，为番茄抗黄化曲叶病毒育种工作提供基础。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 研究的目的和意义

1．2 研究内容

1．3 技术路线

1．4 文献综述

1．4．1 番茄黄化曲叶病发病情况及危害

1．4．2 番茄黄化曲叶病毒介绍

1．4．3 番茄黄化曲叶病抗性鉴定方法

1．4．4 番茄黄化曲叶病的主要防治措施

1．4．5 分子标记技术

1．4．6 抗原筛选及抗性遗传规律

1．4．7 抗病品种选育

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 番茄材料

2．1．2 试验试剂

2．1．3 主要仪器与设备

2．2 试验方法

2．2．1 番茄黄化曲叶病毒病抗性鉴定

2．2．2 番茄基因组DNA的提取与检测

2．2．3 抗感池的建立

2．2．4 AFLP分子标记

2．2．5 SSR分子标记

2．2．6 连锁关系作图

2．2．7 番茄种质资源对番茄黄化曲叶病毒的抗病性鉴定

3 结果与分析

3．1 番茄黄化曲叶病抗性遗传规律分析

3．1．1 遗传群体的构建

3．1．2 番茄黄化曲叶病抗性遗传规律分析

3．2 基因组DNA的提取

3．3 AFLP分子标记结果

3．3．1 预扩增产物和选择性扩增产物的检测

3．3．2 AFLP引物的筛选

3．3．3 F2代单株的AFLP标记

3．3．4 AFLP分子标记结果

3．4 SSR分子标记结果

3．4．1 SSR引物的筛选

3．4．2 F2代单株的SSR标记

3．4．3 AFLP分子标记结果

3．5 连锁关系作图

3．6 抗番茄黄化曲叶病种质资源的筛选

4 讨论

4．1 抗病性鉴定

4．2 遗传距离较远的原因分析

4．3 抗病基因的分子标记

4．4 番茄种质资源的筛选

4．5 试验中需要注意的问题

4．5．1 DNA的提取

4．5．2 酶切链接

4．5．3 SSR分子标记

4．5．4 聚丙烯酰胺凝胶的制备

4．5．5 银染与显影

4．6 工作展望

5 结论

致谢

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的学术论文