姬松茸多糖对镉致鸡肝脏损伤的颉颃作用

摘要

本试验旨在研究姬松茸多糖对镉诱导的鸡肝脏损伤的颉颃作用。将80只7日龄海兰白雄性雏鸡随机分成空白组、中毒、治疗组以及多糖组4组，每组20只。空白组雏鸡饲喂正常全价饲料，同时每只每天通过灌胃方式给予生理盐水0.2 mL;中毒组雏鸡饲喂混有140 mg/kg CdCl2的正常全价饲料，并且每只每天通过灌胃方式给予生理盐水0.2 mL;治疗组雏鸡饲喂混有140mg/kg CdCl2的正常全价饲料，同时每只每天灌胃30 mg/mL姬松茸多糖溶液0.2 mL;多糖组雏鸡饲喂正常全价饲料，同时每只每天灌胃30 mg/mL姬松茸多糖溶液0.2 mL，动物试验持续60d。分别在试验第20、40和60d时，从每组雏鸡中随机选取5只雏鸡，称重后心脏采血处死，快速采取肝脏，称重。采用HE染色法制作肝脏病理组织学切片，观察雏鸡肝脏病理学变化;生物化学试剂盒检测肝脏抗氧化酶（SOD和GSH-PX）活力、肝脏主要转氨酶（ALT和AST）活力以及MDA含量;实时荧光定量法检测肝脏中炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）和热休克蛋白（HSP27、HSP40、HSP60、HSP70和HSP90）mRNA水平;ELISA法检测肝脏中炎性细胞因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）蛋白表达水平;Western blot法检测肝脏中热休克蛋白(HSP60、HSP70和HSP90)的蛋白表达水平。
　　结果发现，与空白组相比，中毒组雏鸡持续的摄入镉，引起镉在肝脏中的蓄积，导致肝脏肿胀、细胞变性坏死，发生炎症反应，并降低肝脏ALT和AST活力，此差异具有统计学意义(P＜0.05);显著抑制肝脏内抗氧化酶(SOD、GSH-PX)活性，提高MDA含量，差异具有统计学意义(P＜0.05);显著提高肝脏中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白表达，差异具有统计学意义(P＜0.05);明显提高肝脏中热休克蛋白HSP27、HSP40、HSP60、HSP70和HSP90的mRNA水平，以及HSP60、HSP70和HSP90的蛋白表达水平，差异具有统计学意义（P＜0.05）。治疗组雏鸡与中毒组相比，镉在肝脏中的蓄积量明显降低，抗氧化酶(SOD、GSH-PX)活性明显提高，MDA含量明显降低，且差异均具有统计学意义（P＜0.05）;与中毒组相比，治疗组雏鸡肝脏炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6 m RNA和蛋白的表达量均显著降低，并且差异具有统计学意义（P＜0.05）;肝脏中热休克蛋白HSP27、HSP40、HSP60、HSP70和HSP90的mRNA水平，以及HSP60、HSP70和HSP90的蛋白表达水平亦显著降低，且差异具有统计学意义（P＜0.05）。多糖组雏鸡肝脏以上指标与空白组雏鸡相比均无显著差异。
　　实验结果表明，雏鸡每日口服姬松茸多糖对长期摄入镉引起的肝脏损伤有明显的保护作用。为进一步揭示姬松茸多糖对镉导致禽类肝损伤的颉颃作用机制的研究和禽类养殖过程中防治镉中毒提供理论依据。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 镉的研究现状

1．1．1 镉的理化性质

1．1．2 镉对环境的污染

1．1．3 镉对机体的毒性作用

1．1．4 镉的肝脏毒性

1．1．5 镉中毒与氧化应激

1．1．6 镉与其他元素的关系

1．2 姬松茸多糖的研究现状

1．2．1 真菌多糖的生物活性

1．2．2 姬松茸多糖的生物活性

1．3 研究目的与意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 中药

2．1．2 试验动物

2．1．3 主要化学试剂

2．1．4 主要仪器与设备

2．2 试验方法

2．2．1 姬松茸多糖的提取、纯化与含量测定

2．2．2 试验动物的饲养

2．2．3 试验动物分组、处理及备捡材料的采取

2．2．4 雏鸡肝脏镉含量的检测

2．2．5 雏鸡肝脏功能的检测

2．2．6 雏鸡肝脏抗氧化功能检测

2．2．7 雏鸡肝脏中炎性细胞因子的检测

2．2．8 雏鸡肝脏中热休克蛋白的检测

2．2．9 雏鸡肝脏病理切片的检测

2．3 数据统计与分析

3 结果

3．3 雏鸡体重和肝脏系数

3．4 雏鸡肝脏中镉含量

3．5 雏鸡肝脏功能的变化

3．6 雏鸡肝脏抗氧化功能的变化

3．7 雏鸡肝脏炎性细胞因子表达的变化

3．7．1 雏鸡肝脏炎性细胞因子mRNA水平的变化

3．7．2 雏鸡肝脏炎性细胞因子含量的变化

3．8 雏鸡肝脏热休克蛋白的变化

3．8．1 雏鸡肝脏热休克蛋白mRNA水平的变化

3．8．2 雏鸡肝脏热休克蛋白表达变化

3．9 雏鸡肝脏病理组织学变化

4 讨论

4．1 姬松茸多糖对镉中毒雏鸡体重及肝脏系数的影响

4．2 姬松茸多糖对镉中毒雏鸡肝脏功能的影响

4．3 姬松茸多糖对镉中毒雏鸡肝脏组织形态学的影响

4．4 姬松茸多糖对镉中毒雏鸡肝脏抗氧化功能的影响

4．5 姬松茸多糖对镉中毒雏鸡肝脏炎性细胞因子表达的影响

4．6 姬松茸多糖对镉中毒雏鸡肝脏HSPs表达的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文