邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯致雌性鹌鹑生殖毒性研究

摘要

邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯(DEHP)作为内分泌干扰物，广泛存在于环境中。由于DEHP可以通过多种途径进入机体，因此其对动物健康和生态环境有严重威胁。然而，DEHP对雌性生殖系统的影响尚未得到充分研究，对禽类雌性生殖毒性研究目前仍属于空白。本研究以雌性鹌鹑作为试验动物，通过灌胃染毒，观察鹌鹁整体状态和卵巢输卵管的病理变化，检测卵巢抗氧化功能、激素水平、下丘脑-垂体-卵巢轴性激素相关因子及相关激素受体的表达。结果表明:
　　(1)DEHP暴露引发鹌鹑卵巢组织病理组织学和超微结构改变，扰乱性激素水平，诱发卵巢发育障碍。
　　(2)DEHP暴露能够诱导鹌鹑卵巢组织中脂质过氧化物生成过量，抑制抗氧化酶系统活性，进而诱发氧化应激，发挥损伤鹌鹑卵巢组织的作用。
　　(3)DEHP暴露能够影响孕激素受体(PGR)和雌激素受体（ERα与ERβ）等受体的表达，干扰下丘脑-垂体-卵巢轴类固醇激素相关因子的表达，阻断类固醇激素的合成。
　　(4)DEHP暴露能干扰雌性鹌鹑下丘脑，垂体-卵巢性腺轴的正常调节功能，扰乱生殖内分泌系统稳态，这是其致鹌鹑雌性生殖毒性的重要机制之一。
　　得出结论，DEHP暴露能够引起雌性鹌鹁卵巢组织的损伤，干扰下丘脑-垂体-卵巢性腺轴的调控功能，阻碍性激素的合成，使性激素分泌紊乱，从而对鹌鹑生殖系统产生严重的毒性作用，且该毒性存在剂量依赖效应。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 DEHP概述

1．1．2 DEHP的接触途径

1．1．3 DEHP在环境中的分布

1．2 DEHP毒理学概述

1．2．1 DEHP急性毒性

1．2．2 DEHP神经毒性

1．2．3 DEHP内分泌毒性

1．2．4 DEHP免疫毒性

1．3 DEHP的雌性生殖毒性

1．3．1 DEHP对卵泡的影响

1．3．2 DEHP对颗粒细胞的影响

1．3．3 DEHP对雌激素分泌水平的影响

1．3．4 DEHP对激素合成酶的影响

1．4 试验的目的与意义

2 材料与方法

2．1 药品与试剂

2．2 仪器设备

2．3 实验总体设计

2．3．1 供试动物及染毒方法

2．3．2 样品采集与处理

2．4 试验动物临床症状观察

2．5 卵巢的病理学观察

2．5．1 卵巢和输卵管病理解剖学的观察

2．5．2 卵巢病理组织学的观察

2．5．3 卵巢超微结构的观察

2．6 鹌鹑血液生化指标的测定方法

2．7 鹌鹑血清性激素水平的测定方法

2．8 鹌鹑卵巢组织抗氧化功能的测定方法

2．8．1 蛋白定量测定

2．8．2 GST含量测定

2．8．3 GPX活力测定

2．8．4 GSH含量的测定

2．8．5 MDA含量测定

2．8．8 CAT酶活性检测

2．9 组织中mRNA表达的测定方法

2．9．1 引物的设计与合成

2．9．2 总RNA提取

2．9．3 反转录反应

2．9．4 实时荧光定量PCR

2．9．5 基因表达的相对差异分析

2．10 性腺轴性激素相关基因mRNA检测方法

2．10．1 下丘脑中性激素相关基因的检测方法

2．10．2 垂体中性激素相关基因的检测方法

2．10．3 卵巢中性激素相关基因

2．11 数据的统计与分析

3 结果

3．1 DEHP暴露雌性鹌鹁的病理变化

3．2 DEHP暴露致雌性鹌鹁卵巢病理学变化

3．2．1 卵巢组织显微结构的观察结果

3．2．2 卵巢组织超微结构的观察结果

3．3 血清中生化分析检测结果

3．3．1 血清肝功能检测结果

3．3．2 血清肾功能检测

3．3．3 血清心功能检测

3．4 DEHP暴露鹌鹁卵巢组织中抗氧化功能的变化

3．4．1 卵巢组织中GSH、GST和GPX含量检测结果

3．4．3 卵巢组织中MDA含量和T-SOD活性检测结果

3．5．1 DEHP暴露后鹌鹑血清中性激素含量检测结果

3．5．2 DEHP暴露对鹌鹑下丘脑性激素分泌相关mRNA表达的影响

3．5．3 DEHP暴露鹌鹁垂体性激素分泌相关mRNA表达水平

3．5．4 DEHP暴露鹌鹁卵巢中性激素相关基因mRNA表达水平

3．5．5 性激素及其相关基因的相关性分析

4 讨论

4．1 鹌鹑在评价DEHP雌性生殖毒性中的应用

4．2 DEHP致雌tI生鹌鹑的毒性作用

4．2．1 DEHP致雌性鹌鹑毒性的临床表现

4．2．2 DEHP对鹌鹑卵巢和输卵管的影响

4．2．3 DEHP致雌性鹌鹑生化功能的影响

4．3 DEHP致鹌鹁卵巢组织的病理损伤

4．3．1 DEHP致鹌鹑显微和超显微结构的变化

4．3．2 DEHP致鹌鹁卵巢组织产生氧化应激

4．4 DEHP致雌性鹌鹑性腺轴激素分泌紊乱

4．4．1 DEHP对性腺发育期雌性鹌鹑血清内性激素水平的影响

4．4．2 DEHP对下丘脑和垂体中雌激素分泌关键基因的影响

4．4．3 DEHP对卵巢内雌激素生成通路上关键基因表达的影响

5 结论

致谢

参考文献

攻读硕士学位期间发表的学术论文