声明
摘要
1引言
1．1贾第虫概述
1．1．1贾第虫和贾第虫病
1．1．2贾第虫的分类和生活史
1．1．3贾第虫的致病机理
1．1．4贾第虫病的临床表现
1．2贾第虫病诊断方法的研究进展
1．2．1病原形态学检测
1．2．2分子生物学检测
1．2．3免疫学诊断检测
1．3贾第虫贾第素抗原的研究进展
1．3．1贾第素的研究进展
1．3．2贾第素抗原研究进展
1．4研究的目的和意义
2材料与方法
2．1材料
2．1．1虫种和菌株
2．1．2实验动物
2．1．3主要试剂
2．1．4主要仪器和设备
2．1．5重要数据分析软件
2．2方法
2．2．1 γ-贾第素重组蛋白的诱导表达和纯化
2．2．2 γ-贾第素多克隆抗体的制备
2．2．3 γ-贾第素蛋白间接ELISA方法建立
2．2．4贾第虫全基因组提取
2．2．5 γ-贾第素巢式PCR检测方法建立
2．2．6γ-贾第素环介导等温扩技术(LAMP)检测方法建立
3结果与分析
3．1重组蛋白的诱导表达及纯化
3．1．1重组蛋白的诱导条件优化及可溶性分析
3．1．2纯化重组γ-贾第素蛋白的SDS-PAGE分析
3．1．3纯化重组γ-贾第素蛋白的蛋白定量
3．2．1抗原包被浓度与血清稀释度的确定
3．2．2抗原最佳包被条件的确定
3．2．3封闭液和封闭时间的确定
3．2．4酶标抗体稀释度和孵育时间的确定
3．2．5显色时间的确定
3．2．6间接ELISA临界值的确定
3．2．7重复性实验和敏感性实验
3．2．8特异性实验
3．2．9临床样品的检测
3．3．2 γ-贾第素巢式PCR反应退火温度优化
3．3．3 γ-贾第素巢式PCR反应敏感性实验
3．3．4γ-贾第素巢式PCR反应特异性实验
3．3．5临床样品检测
3．4γ-贾第素LMAP检测方法建立
3．4．1 LAMP反应过程优化
3．4．2 LAMP反应时间优化
3．4．3 LAMP反应温度优化
3．4．4 LAMP反应敏感性实验
3．4．5 LAMP反应特异性实验
3．4．6临床样品检测
4讨论
4．3 LMAP-HNB的结果分析
4．4 ELISA、巢式PCR和LAMP检测方法的建立
5结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
