小鹅瘟单管巢式PCR诊断方法的建立及初步应用

摘要

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒引起的主要侵害4-20日龄雏鹅和雏番鸭的一种急性或亚急性、高度接触性和败血性传染病，给养鹅业造成了严重危害。该病可从临床症状及流行病学特点作出初步诊断，但确诊需借助病原学检查、血清学方法和分子生物学技术。病原学检查和血清学方法均存在不够敏感、检测所需时间长等不足，不能满足临床快速诊断小鹅瘟的需要。而PCR技术具有敏感性高、特异性强等优点，能够较好满足临床快速准确诊断疾病的需要。本试验根据GenBank发表的小鹅瘟病毒B株全基因序列，针对VP3基因保守区，设计了两对扩增主要结构蛋白VP3基因的特异性引物，对小鹅瘟病毒延边分离株基因组DNA进行了PCR扩增，建立了小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法，扩增出了与预期片段大小相符的长度为406bp的基因片段。特异性试验表明，只有小鹅瘟病毒模板能扩增出特异性条带。敏感性试验表明，当病料中小鹅瘟病毒核酸含量为0.02175fg/μL时，仍可以检测到，出现清晰的特异性片段。应用小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法对延边地区疑似小鹅瘟病死雏鹅80只进行了检测，有典型病理变化的20只病死雏鹅，阳性检出率均为100％(20/20)，无典型病理变化的60只病死雏鹅，阳性检出率为93.3％(56/60)，由此可见，本实验建立的小鹅瘟病毒单管巢式PCR诊断方法具有极高的敏感性和特异性且检出率极高，可作为一种有效的临床诊断方法。