声明
摘要
1引言
1．1轮状病毒概况
1．1．1轮状病毒病原学特征
1．1．2 NSP4在RV发病机制中的作用
1．1．3 RV整联蛋白受体的研究
1．2益生菌概况
1．2．1益生菌的定义
1．2．2益生菌的功能效应和特性
1．2．3益生菌的安全性
1．2．4益生菌对肠道微生态系统的影响
1．3益生菌抗病毒概况
1．3．1益生菌抗病毒作用的研究现状
1．3．2益生菌抗病毒机制研究进展
1．3．3食淀粉乳杆菌及其抗病毒作用
1．3．4肠上皮细胞的应用
1．4研究目的与意义
2材料与方法
2．1材料
2．1．1菌毒株、质粒、实验动物
2．1．2主要试剂
2．1．3主要溶剂配制
2．1．4主要实验仪器
2．2方法
2．2．1食淀粉乳杆菌培养上清抗RV能力的检测技术
2．2．2重组猪轮状病毒NSP4蛋白的表达
2．2．3重组蛋白的纯化
2．2．4重组蛋白的Western-blot鉴定
2．2．5重组蛋白免疫原性测定
2．2．6食淀粉乳杆菌培养上清对IPEC-J2细胞内NSP4 mRNA及相关因子的作用
2．2．7食淀粉乳杆菌对乳鼠空肠组织内NSP4 mRNA及相关因子的作用
2．2．8统计学方法
3结果
3．1益生菌抗病毒功能测定
3．1．2 RV毒力测定
3．1．3食淀粉乳杆菌培养上清的细胞毒性实验
3．1．4食淀粉乳杆菌培养上清对RV病毒的抑制率
3．2重组RV NSP4蛋白的表达
3．2．1 RV NSP4基因的克隆
3．2．2重组菌的构建
3．2．3重组蛋白的表达
3．3重组蛋白的纯化和免疫原性鉴定
3．3．1重组蛋白的纯化
3．3．2 Western-blot免疫原性鉴定
3．4免疫抗体检测
3．5．1食淀粉乳杆菌培养上清短长期预处理IPEC-J2细胞抗RV最强组
3．5．2间接免疫荧光鉴定
3．5．3实时荧光定量PCR检测食淀粉乳杆菌培养上清对NSP4 mRNA的影响
3．5．4 IPEC-J2细胞内钙离子测定
3．5．5 IPEC-J2细胞内磷脂酶C测定
3．5．6 IPEC-J2细胞整联蛋白α2β1测定
3．5．7 IPEC-J2细胞内Dicer测定
3．6食淀粉乳杆菌抗RV中NSP4相关因素分析
3．6．1乳鼠体重变化及体重增长率
3．6．2轮状病毒ELISA检测
3．6．3食淀粉乳杆菌对乳鼠空肠组织NSP4 mRNA水平的影响
3．6．4食淀粉乳杆菌对乳鼠空肠组织中钙含量的影响
3．6．5乳鼠空肠组织中磷脂酶C的测定
3．6．6乳鼠空肠组织整联蛋白α2β1的测定
3．6．7乳鼠空肠组织中Dicer的测定
4讨论
4．1食淀粉乳杆菌培养上清体外抗RV作用
4．2食淀粉乳杆菌对RV感染乳鼠后的相关效应
4．3食淀粉乳杆菌及其培养上清在体内外对NSP4功效的影响
4．4食淀粉乳杆菌及其培养上清在体内外对NSP4表达及其相关因素的相互作用
5结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文
