人体拓扑异构酶Ⅰ、微管蛋白和DNA的原子力显微镜成像研究

摘要

1、气相和液相条件下在云母表面对人体DNA拓扑异构酶Ⅰ的原子力显微镜成像研究
　　 采用原子力显微镜(AFM)在气相和液相条件下观察了重组的人体DNA拓扑异构酶Ⅰ(TOPOI)的形貌。低浓度(0.3U/μl)的TOPOI在云母表面吸附2h后,在液相和气相下成像,均可扫描得到完全分散的单个TOPOI,对气相和液相下扫描的图像进行了比较,结果显示两种环境下扫描得到的酶的形貌有所不同。高浓度(4U/μl)的TOPOI在吸附1.5h后可以在云母表面形成一层单分子蛋白膜,该蛋白膜具有良好的稳定性和平整度。
　　 2、人体拓扑异构酶Ⅰ与DNA结合后在云母表面的成像研究
　　 采用Ni2+将DNA固定在云母的表面,在气相条件下运用原子力显微镜对其进行了成像研究,对单个DNA分子进行了高分辨的观察。当使用高浓度DNA分子进行成像时,观察到了DNA网络结构和DNA膜状结构。TOPOI与DNA分子结合后,TOPOI分子可以连同DNA一起吸附到云母表面。
　　 3、微管蛋白聚合现象研究
　　 采用原子力显微镜和紫外可见分光光度计对微管蛋白聚合现象进行了研究,采用原子力显微镜在液相下扫描观察到了吸附在APTES-mica表面的微管;采用紫外可见分光光度计检测了微管蛋白聚合的动力学曲线。
　　 4、DNA在石墨表面的原子力显微镜成像研究
　　 采用原子力显微镜(AFM)、傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)对胡敏酸在HOPG表面的吸附进行了研究,采用傅里叶变换红外的检测确认了胡敏酸在HOPG表面的吸附。通过原子力显微镜观察了胡敏酸水溶液及其在酸性及碱性条件下、以及它与无机盐作用后在HOPG表面的吸附现象,显微成像研究表明胡敏酸可在HOPG表面产生成膜现象。以胡敏酸膜为模板,可以吸附DNA分子。采用原子力显微镜观察到了吸附在胡敏酸膜表面的DNA分子。