杜仲叶片和果实中活性成分的提取分离及杜仲油氧化稳定性研究

摘要

本论文以我国特有树种杜仲的可持续利用部位叶片和翅果为原料，采用离子液体-超声辅助提取技术对杜仲叶中绿原酸进行提取，采用响应面法对提取工艺进行优化，采用大孔树脂法对杜仲叶离子液体提取液中的绿原酸进行富集纯化;采用超声辅助提取技术对杜仲油进行提取，采用响应面法对提取工艺进行优化，并对不同方法处理后的油脂氧化稳定性进行了研究。本文系统地研究了杜仲叶中的绿原酸及杜仲油高效提取分离的工艺，以及绿原酸纯化方法、油脂氧化稳定性研究，其主要内容如下:
　　(1)建立了高效液相色谱(HPLC)法检测绿原酸的方法，色谱条件为:检测波长为:328 nm;流动相组成及比例:甲醇∶0.4％磷酸=22∶78;色谱柱:Kromasil C18(5μm，4.6mm×250 mm)，流速:1.0 mL/min，进样量10μL，柱温:室温(25℃)，等度洗脱35min。
　　确定了最佳提取杜仲叶绿原酸的方法，采用响应面法对其提取工艺条件进行了优化。考察了不同溶剂、离子液体种类、离子液体溶液浓度、浸泡时间、超声功率、超声时间和液料比等因素对绿原酸得率的影响。研究结果表明，以C4mimBr离子液体为最佳提取溶剂，浓度为0.5 mol/L，浸泡时间为2h。在此基础上，采用Design Expert7.0统计分析软件的三因素三水平的响应面分析法进行提取工艺优化，得到最佳提取工艺条件:超声功率200 W、超声时间45 min、液料比16∶1。绿原酸的实际得率可达.0.71mg/g。
　　(2)进行了大孔树脂对杜仲叶C4mimBr离子液体提取液中绿原酸富集纯化工艺参数的研究。通过对D101、HPD400A、HPD722、HPD750、HPD850、HPD500和ADS-17大孔树脂对杜仲叶离子液体提取液中绿原酸纯化工艺的考察，筛选出用HPD750型树脂纯化绿原酸，最佳纯化工艺条件为:吸附温度为25℃，饱和吸附时间4h，选用绿原酸浓度为0.38 mg/mL的杜仲叶C4mimBr离子液体提取液为纯化样品，其对绿原酸的饱和吸附量为3.56 mg/g;洗脱剂为90％的乙醇溶液，解吸时间1.5 h，解吸温度50℃，解吸液中绿原酸含量为3.34 mg/mL，浓缩至干，浸膏中绿原酸纯度为26％。
　　(3)确定了采用超声强化溶剂提取法从杜仲翅果中提取杜仲油的方法，对提取工艺进行了优化实验。考察了浸泡时间、超声时间、超声功率、超声温度和液料比等因素对杜仲油得率的影响，在此基础上，根据Box-Behnken试验设计原理采用三因素三水平的响应面分析法进行提取工艺优化，以杜仲油得率为指标，得到最佳提取工艺条件为:浸泡时间3h，超声功率200 W，超声时间40 min，超声温度50℃，液料比20∶1。杜仲油的实际得率可达0.29 g/g。
　　(4)对制备的杜仲油不同应用条件下（高热、油炸、微波辐射、UVA和UVB辐射）的氧化稳定性采用多指标进行考察。定期取样检测不同条件下杜仲油过氧化值、茴香胺值、酸值、共轭二烯值和丙二醛含量，结果显示，杜仲油在长期高热储存、油炸、微波辐射的条件下氧化程度较小，比较稳定，而在UVA和UVB辐射辐射条件下，氧化严重，易酸败。因此，在杜仲油的加工、储存、运输过程中要避免UV辐射，还应尽量避免高温条件储存，尽量避免长时间油炸或微波辐射。

目录

摘要

1 绪论

1．1 杜仲研究现状

1．1．1 杜仲可持续利用部位主要活性成分

1．1．2 绿原酸

1．1．3 杜仲油

1．1．4 杜仲的主要药理作用

1．2 绿原酸的提取分离方法

1．2．1 浸提法

1．2．2 回流提取法

1．2．3 微波强化提取法

1．2．4 超声强化提取法

1．2．5 绿原酸纯化方法

1．3 杜仲油的提取方法

1．3．1 超临界CO2法

1．3．2 压榨法

1．3．3 有机溶剂浸出法

1．3．4 微波强化提取法

1．3．5 其它提取方法

1．4 杜仲的开发与利用

1．5 本课题研究目的与意义

2 离子液体-超声辅助提取绿原酸

2．1 实验材料与仪器

2．1．1 实验材料

2．1．2 实验试剂和仪器

2．2 实验方法

2．2．1 标准品溶液的配制

2．2．2 样品溶液的制备

2．2．3 分析方法

2．2．4 单因素实验

2．2．5 工艺优化实验

2．2．6 SEM分析

2．2．7 红外分析

2．2．8 方法学考察

2．2．9 与传统方法的比较

2．3 结果与讨论

2．3．1 检测方法的建立

2．3．2 单因素实验

2．3．3 响应面法优化提取工艺参数

2．3．4 最佳工艺条件的验证实验

2．3．5 SEM分析

2．3．6 红外分析

2．3．7 提取方法的比较

2．3．8 方法考察

2．4 本章小结

3 大孔树脂纯化绿原酸

3．1 实验材料与仪器

3．1．1 实验材料

3．1．2 实验试剂和仪器

3．2 实验方法

3．2．1 绿原酸的定量分析

3．2．2 提取液的制备

3．2．3 大孔树脂的预处理

3．2．4 大孔树脂含水率测定

3．2．5 大孔树脂的筛选

3．2．6 静态吸附实验

3．2．7 解吸实验

3．2．8 纯度测定

3．3 结果与讨论

3．3．1 大孔树脂的筛选

3．3．2 静态吸附动力学

3．3．3 树脂解吸

3．4 本章小结

4 超声强化溶剂法提取杜仲油

4．1 实验材料与仪器

4．1．1 实验材料

4．1．2 实验试剂和仪器

4．2 实验方法

4．2．1 样品制备

4．2．2 分析方法

4．2．3 单因素实验

4．2．4 工艺优化实验

4．3 结果与讨论

4．3．1 GC-MS检测结果

4．3．2 单因素实验

4．3．3 响应面法优化提取工艺参数

4．3．4 最佳工艺条件的验证实验

4．4 本节小结

5 杜仲油氧化稳定性

5．1 实验材料与仪器

5．1．1 实验材料

5．1．2 实验试剂和仪器

5．2 实验方法

5．2．1 样品制备

5．2．2 过氧化值测定方法

5．2．3 茴香胺值测定方法

5．2．4 酸值测定方法

5．2．5 共轭二烯值测定方法

5．2．6 丙二醛测定方法

5．3 结果与讨论

5．3．1 过氧化值比较

5．3．2 茴香胺值比较

5．3．3 酸值比较

5．3．4 共轭二烯值比较

5．3．5 丙二醛含量比较

5．4 本章小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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