BbZYL1株支气管败血波氏杆菌人工感染家兔的病理变化及其抗原性研究

摘要

兔支气管败血波氏杆菌病是由支气管败血波氏杆菌引起的呼吸系统疾病。该菌主要经空气传播，引起呼吸道感染;幼兔感染本菌后多为急性发病而死亡;成年兔感染后则多呈隐性感染，常伴随鼻炎、支气管肺炎等，是养兔业中主要的细菌性传染病之一，常给养兔业带来损失。本实验通过从临床疑似支气管败血波氏杆菌病的病死兔肺内分离得到一株细菌，应用VITEK2 Compact全自动微生物分析系统仪完成细菌生化鉴定及药敏试验，通过Mega(vevsion4.0)及MegAlign(DNAstar5.06)对16SrRNA基因绘制进化树及同源性比较以了解BbZYL1株的亲缘关系。结果表明此株细菌是支气管败血波氏杆菌，命名为BbZYL1。生化试验及药敏试验谷氨酰芳胺酶pNA、L-脯氨酸芳胺酶、酪氨酸芳胺酶、尿素酶、柠檬酸盐（钠）、L-乳酸产碱、琥珀酸盐产碱均为阳性，对头孢替坦、头孢唑啉、呋喃妥因具有耐药性，与BX640428等序列同源性高达100％。
　　由于该菌对呼吸系统的损害严重，所以患病动物的病理特征主要表现为为小叶性肺炎和急性气管炎，但目前为止还没有人专门针对支气管败血波氏杆菌引起兔子死亡的病理学变化全面和系统研究，所以通过对3月龄的家兔以1.5×1012 CFU剂量的BbZYL1株进行滴鼻感染。观察家兔发病及死亡情况。开展组织病理研究。剖检病理变化是死亡家兔呼吸系统病变严重，内脏器官病理变化为肺脏表现小叶性肺炎，切面呈暗红色，充血水肿;气管粘膜充血，有少量出血点;肾脏多呈颗粒变性，中度肿大质地柔软，皮质苍白增厚及髓质充血;脑和脑膜血管呈不同程度充血;肝脏、心脏呈颗粒变性。病理组织切片发现肺脏呈重度的化脓性纤维素性坏死性肺炎;气管粘膜上皮细胞脱落;肾呈膜性增生性肾小球肾炎;大脑为淋巴细胞和浆细胞浸润，并伴有小血管内皮细胞肿胀;免疫器官中淋巴结、扁桃体、脾的组织均出现严重损伤;消化系统也出现上皮细胞脱落等病变。
　　家兔通常对支气管败血波氏杆菌呈隐性感染，发病后难以控制，为今后对支气管败血波氏杆菌的疫苗的研制奠定基础，对该菌株的免疫原性开展研究，通过灭活BbZYL1株，制作抗原对2月龄家兔进行免疫接种，测定效价并进行抗体跟踪，研究这株支气管败血波氏杆菌免疫原性。结果表明，免疫后21天三组实验兔的血清效价分别为212、28、25/24，表明该菌株有较好的免疫原性，为进一步研究疫苗奠定基础。

目录

摘要

1 绪论

1．1 课题背景

1．2 支气管败血波氏杆菌病简介

1．3 病原学

1．3．1 形态及培养特性

1．3．2 生物学特性及致病性

1．4 流行病学

1．5 临床症状及病理变化

1．6 诊断方法

1．6．1 细菌学诊断

1．6．2 分子生物学诊断

1．7 防制

2 兔支气管败血波氏杆菌分离鉴定

2．1 实验材料

2．1．1 样本来源

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要器材

2．1．4 引物

2．2 实验方法

2．2．1 细菌分离及初步鉴定

2．2．2 生化鉴定及药敏试验

2．2．3 16S rRNA基因序列测定及系统发育分析

2．3 实验结果

2．3．1 细菌分离及初步鉴定

2．3．2 生化鉴定及药敏试验

2．3．3 16S rRNA基因序列测定及系统发育分析

2．4 讨论

2．5 本章小结

3 人工感染兔支气管败血波氏杆菌的病理形态学观察

3．1 材料及方法

3．1．1 支气管败血波氏杆菌菌株

3．1．2 试验动物

3．1．3 主要试剂及仪器

3．2 试验方法

3．2．1 菌株的复苏培养

3．2．2 细菌平板计数实验

3．2．3 人工感染实验兔实验

3．2．4 临床症状观察

3．2．5 病理学观察

3．2．6 病理组织切片制作与观察

3．3 结果

3．3．1 细菌计数结果

3．3．2 临床症状

3．3．3 剖检变化

3．3．4 组织学变化

3．4 讨论

3．5 小结

4 支气管败血波氏杆菌对兔的免疫原性初步试验

4．1 材料

4．1．1 菌株

4．1．2 实验动物

4．1．3 主要试剂

4．2 实验方法

4．2．1 细菌培养

4．2．2 标准抗原、抗体的制备

4．2．3 抗体效价跟踪

4．3 实验结果

4．3．1 细菌灭活试验结果

4．3．2 标准抗原及抗体的制备

4．3．3 抗体效价跟踪

4．4 讨论

4．5 小结

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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