BAP1基因启动子区G-四链体的结构鉴定及其对基因表达调控的研究

摘要

越来越多的证据表明，在癌症的发展和进展中，BAP1起到了关键作用，但是目前对BAP1基因表达的调控机制尚不清楚。G-四链体是富含串联重复鸟嘌呤的DNA或RNA组成的二级结构。由氢键连接的四个鸟嘌呤形成环状平面G-四分体，三个或更多G-四分体堆叠形成了G-四链体。大量的研究表明，G-四链体结构在肿瘤发生过程中起着重要的调节作用，因此，G-四链体结构和相关的解旋酶在癌症治疗中是一个新的探索领域。
　　在本论文中，我们发现BAP1启动子区域反义链上包含多个串联的鸟嘌呤以及重复序列，这些序列具有很高的形成G-四链体结构的可能性。我们根据BAP1启动子反义链的鸟嘌呤富集区域序列合成了寡核苷酸链，在圆二色性光谱分析研究中，这些序列显示了G-四链体结构特征吸收峰，进一步的分析也揭示了它们可以形成多种G-四链体结构。在报告载体研究中，BAP1启动子中预测G-四链体结构形成序列的突变或删除会降低报告载体的表达，显示G-四链体的存在促进了BAP1基因表达。与此相符，具有DNA解旋酶活性的染色质重塑蛋白CHD2和CHD7与BAP1启动子结合并可能消除G4-四链体结构以抑制BAP1基因表达。
　　总之，BAP1启动子反义链上包含了可以形成G-四链体结构的序列，这些G-四链体结构促进BAP1基因的表达，而DNA解旋酶CHD2和CHD7可能通过解开这些G-四链体来抑制BAP1基因表达。

目录

摘要

1 绪论

1．1 G-四链体

1．2．2 G-四链体结构与解旋酶

1．3 染色质解旋酶DNA结合蛋白

1．3．1 解旋酶CHD2和CHD7在发育中的作用

1．4 本论文的研究目的及研究意义

1．4．1 研究目的

1．4．2 研究意义

2 实验材料与实验方法

2．1．2 仪器

2．1．3 实验试剂的配置

2．2 实验方法

2．2．1 细胞培养与瞬转

2．2．2 载体的构建

2．2．3 慢病毒感染细胞

2．2．4 实时定量PCR测定RNA表达

2．2．5 模板处理

2．2．6 圆二色谱分析

2．2．7 DNA银染

2．2．8 基因组DNA提取

2．2．9 引物的设计

2．2．10 Gluc荧光素酶活性检测

2．2．11 SEAP值的检测

2．2．12 斑点杂交实验

2．2．13 ChIP实验

2．2．14 半定量PCR

3 实验结果

3．1．2 利用QGRS Mapper预测G-四链体

3．2 圆二色谱检测G-四链体结构

3．2．1 寡核苷酸链的摩尔椭圆率检测

3．2．2 寡核苷酸链的热稳定性检测

3．3 凝胶电泳检测G-四链体结构

3．4 ChIP检测G-四链体结构

3．5 G-四链体结构调控BAP1启动子活性

3．5．2 BAP1启动子上G-四链体对基因表达的调控

3．6 CHD2和CHD7对BAP1启动子中G-四链体结构的作用

3．6．2 解旋酶对外源BAP1启动子的活性影响

3．6．3 解旋酶对内源BAP1基因表达的调控

讨论

结论

参考文献

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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