银杏叶提取物对大鼠真皮成纤维细胞的影响

摘要

皮肤是人体衰老过程中最为明显的器官之一,皮肤衰老主要表现为出现皱纹、弹性下降、免疫功能降低等。皮肤衰老反映在细胞水平即为细胞衰老。成纤维细胞是真皮组织的主要效应细胞,能产生胶原、纤维粘连蛋白等多种细胞外基质,成纤维细胞及其所产生的细胞外基质、基质所保持的水分是维持皮肤弹性的物质基础。已有大量的研究证明成纤维细胞因其特有的生物学特性改变,在皮肤老化过程中扮演着重要的角色。
　　 银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract,EGb761)是一种含有多种成分的活性物质,主要含有黄酮甙(占24％)、萜类(包括银杏内酯和白果内酯,占6％)、有机酸(包括香草酸、对羟基苯甲酸、莽草酸等,占5％～10％)以及多种氨基酸(占10％)。
　　 本文研究了银杏叶提取物对大鼠真皮成纤维细胞的影响,以初步探讨这种物质用于防治皮肤老化的可能性。
　　 原代培养大鼠真皮成纤维细胞(fibroblast,FB)传代培养后,以不同浓度的银杏叶提取物(EGb761,20mg/L、50mg/L、100mg/L)对其生长进行干预,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物干预后24h、48h、72h时FB细胞活力变化,碱水解法测定药物干预后3d、6d时培养液中羟脯氨酸含量变化,以分别反映EGb761对大鼠真皮FB增殖及胶原蛋白分泌的影响。以不同浓度(20mg/L、50mg/L、100mg/L)的EGb761对其生长进行干预后,H2O2诱导其损伤。MTT法观察细胞活力,硫代巴比妥酸(TBA)法和黄嘌呤氧化酶法分别测定丙二醛(Malon dialdehyde,MDA)和超氧化物歧化酶(Super oxidedismutase,SOD)含量;荧光探针DCFH-DA进行活性氧(ROS)检测,流式细胞术(FCM)测定细胞凋亡。
　　 研究表明不同浓度的EGB761在一定范围内能促进大鼠真皮FB增殖及胶原蛋白分泌,能提高H2O2诱导的成纤维细胞细胞存活率和SOD活力;降低MDA含量,活性氧水平和细胞凋亡率,且呈一定的剂量相关性。