CpG ODN增强人外周血单个核细胞对淋巴瘤细胞系Jurkat杀伤活性的实验研究

摘要

背景和目的：
　　 恶性淋巴瘤(Malignant Lymphoma,ML)是起源于人类免疫系统细胞及其前体细胞的恶性增生性疾病。在恶性肿瘤中,我国ML发病率排在第11位,常发生在青壮年,严重威胁着人类的健康和生命。联合化疗是现阶段淋巴瘤治疗的主要手段之一,在提高治疗效果和延长患者生存期方面具有非常重要的作用。但是化疗药物毒副作用较大,常引起患者骨髓抑制、免疫功能低下等毒副反应,使患者难以坚持治疗,而且化疗药物在治疗过程中出现的原发或继发性耐药已成为目前临床治疗中的难题之一。因此,有必要寻求高效低毒的抗肿瘤药物。近年来,国内外研究人员对CpG ODN增强免疫及抗肿瘤作用进行了广泛而深入的研究,结果表明CpG ODN能够通过增强免疫而具有抗肿瘤作用。
　　 19世纪,纽约的外科医生William Coley注意到细菌的提取物对肿瘤具有治疗作用,后来人们发现其中的有效成分是含有未甲基化CpG二核苷酸DNA(CpGoligodeoxynucleotides,CpG ODN)。近来年研究发现,CpG ODN能直接激活B细胞、树突状细胞、巨噬细胞、抗原递呈细胞；并能间接激活T细胞及NK细胞；还可诱导TH1型为主的免疫应答。作为一种高效低度的免疫佐剂,在肿瘤、免疫缺陷病、感染和过敏性疾病治疗中具有很强的潜在应用价值。
　　 本实验应用人工合成的核苷酸序CpG ODN,通过对PBMC的刺激和活化作用,观察活化后的PBMC对淋巴瘤细胞系Jurkat的杀伤活性,为临床应用提供实验依据。
　　 方法：
　　 应用体外细胞培养技术,采用MTT法,Elisa法检测CpG ODN对人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖活性以及活化后的PBMC对Jurkat细胞的杀伤活性。应用SPSS13.0统计软件分析,数据以均数±标准差((x)±S)表示,采用单因素方差分析加LSD两两比较法进行分析。检验水准α=0.05。
　　 结果：
　　 1.外周血单个核细胞培养上清中IL-12和INF-γ的表达水平：
　　 CpO ODN组、PHA组、PHA+CpG ODN组培养上清液中IFN-γ、IL-12含量显著高于空白对照组,差别有统计学意义(P＜0.05)；CpG ODN组培养上清液中IFN-γ、IL-12含量显著高于PHA组(P<0.05)；CpG ODN与PHA联合能诱导更高水平的IL-12及INF-γ,与CpG ODN组相比差别有统计学意义(P<0.05)。
　　 2.淋巴细胞增殖反应(MTT法)：
　　 CpG ODN组、PHA组、PHA+CpG ODN组镜下均可见有成团的细胞生长,而对照组几乎没有成团细胞生长。试验结果显示CpG ODN、PHA、PHA+CpG ODN较对照组刺激人PBMC的增殖能力明显提高,CpG ODN组和PHA+CpG ODN组细胞增殖也显著高于PHA组,差别有统计学意义(P<0.05)
　　 3.CpG ODN活化的PBMC对Jurket细胞系的杀伤作用：
　　 CpG ODN组、PHA组、PHA+CpG ODN组镜下可见Jurkat细胞抱团较对照组小,且位于边缘的Jurkat细胞大量崩解,以联合组最为明显,而空白对照组Jurkat细胞生长较好,无明显崩解。结果显示经CpG ODN、PHA活化后的PBMC对Jurkat细胞杀伤活力明显高于空白对照组(P<0.05)；CpG ODN组的杀伤活性明显高于PHA组(P<0.05)；CpG ODN与PHA联合更能提高人PBMC对Jurket细胞的杀伤活力(P<0.05),二者具有协同作用。
　　 结论：
　　 1.CpG ODN和PHA均可促进PBMC的增殖,且CpG ODN促进PBMC的增殖作用显著强于PHA,二者联合作用更强。
　　 2.CpG ODN和PHA均可促进PBMC分泌细胞因子,且CpG ODN促进PBMC分泌细胞因子的作用显著强于PHA,二者联合作用更强。
　　 3.CpG ODN、PHA激活的PBMC可增强对Jurkat细胞的杀伤作用,CpG ODN激活的PBMC对Jurkat细胞的杀伤作用显著强于PHA,二者联合作用更强。

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材料与方法

结果

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结论

参考文献

综述部分

参考文献

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