核因子-κB圈套寡脱氧核苷酸联合紫杉醇治疗肺癌的探讨

摘要

背景：肺癌是目前严重威害人类健康和生命的恶性肿瘤之一，根据流行病学相关研究结果，近年来，肺癌的发病率和死亡率呈上升趋势，据统计，占所有恶性肿瘤发病率的12％。在欧美某些国家和我国大中城市，其发病率已居于首位，且发病年龄趋于年轻化，与吸烟、环境污染物密切相关，其治疗难度大、迅速转移、死亡率高为特点。肿瘤的浸润与转移已成为当今导致治疗失败和患者死亡的主要原因，因此寻找关键靶位点抑制肺癌血管生成，为肺癌的临床治疗开辟一条新的途径。
　　 核因子-κB(nuclear factor-kappa B，NF-κB)是一种多显性基因转录因子，与多种基因的转录密切相关，在肿瘤细胞中高表达，与多种细胞基因的启动子和增强子发生特异性结合，与血管内皮生长因子(Vascular endothelial growthfactor，VEGF)、环氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)关系密切，参与炎症反应、损伤应激、免疫防御、细胞增殖及凋亡等过程。核因子-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)是目前研究发现进行体内外基因调控的强有力工具，含有转录因子识别序列的寡核苷酸或质粒转入细胞，与核内基因启动子区相应顺势作用元件竞争结合转录因子，从而抑制启动子活化，达到抑制基因转录和翻译的目的，其能明显抑制癌细胞的增殖，并可提高肿瘤细胞对化疗药物(紫杉醇)的敏感性。
　　 目的：研究NF-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)联合紫杉醇对肺癌A549细胞增殖、凋亡、血管生成的影响及其作用机制，为临床实践提供理论依据。
　　 方法：
　　 1、培养人肺癌细胞A549。
　　 2、脂质体瞬时转染法介导核因子-κB圈套寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)和核因子-κB错义圈套寡核苷酸(NF-κB scramble decoy ODN)处理A549细胞。
　　 3、MTT试验观察干预96 h经NF-κB decoy ODN及NF-κB Scramble decoyODN作用后肺癌A549细胞生长曲线。
　　 4、设对照组、NF-κB decoy ODN组、紫杉醇组(1000 ng/mL)和NF-κB decoyODN+紫杉醇组，RT-PCR法测环氧合酶-2(COX-2)mRNA水平表达，免疫组织化学法测血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达，流式细胞术检测各组48 h后细胞凋亡率。
　　 结果：
　　 1、核因子-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)使细胞生长明显受到抑制，时间越长抑制作用越明显。
　　 2、核因子-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)、紫杉醇干预后A549细胞的环氧合酶-2(COX-2)mRNA水平表达及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达均下降，COX-2 mRNA水平表达各组浓度分别是：0.71±1.4μg/μL、0.44±1.8μg/μL、0.51±7.2μg/μL、0.34±9.5μg/μL(F=7.8，P<0.05)，VEGF蛋白表达各组细胞阳性率分别是：85±0.50％，63±0.26％，57±1.5％，21±0.34％(F=21，P<0.05)。
　　 3、核因子-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)联合紫杉醇可促使A549细胞凋亡增加，二者联用呈协同或相加作用，各组细胞的总凋亡率分别是：(16.8±0.01)％、(5.6±0.02)％、(32.6±0.04)％，均高于对照组(6.0±0.02)％(F=14，P<0.05)。
　　 结论：
　　 1.核因子-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)能明显抑制肺癌A549细胞的生长。
　　 2.核因子-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)联合紫杉醇可明显抑制肺癌A549细胞的生长，该作用可能与环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达相关。
　　 3.核因子-κB圈套寡脱氧核苷酸(NF-κB decoy ODN)联合紫杉醇可增强对肺癌A549细胞增殖的抑制及凋亡的诱导，二者具有协同抗肿瘤作用。