核因子-κB圈套寡脱氧核苷酸联合顺铂治疗肺癌的探讨

摘要

肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤，根据流行病学资料显示肺癌在人类癌症的发病率和死亡率中均居首位，虽经化疗、放疗、营养支持等治疗，5年生存率仍低于15％。因此，探讨肺癌新的治疗方法具有十分重要的意义。
　　 核转录因子кB(nuclear factor of kappa B，NF-кB)是普遍存在于生物界的一种转录子，为多种信号转导途径的汇聚点，具有调节免疫、炎症、细胞增殖分化的作用。近年来研究表明，NF-кB与肿瘤的发生、发展、侵袭、转移及肿瘤的放化疗抵抗有关。对环氧化酶-2(Cyclo-oxygenase-2，COX-2)和周期蛋白D1(CyclinD1)基因的序列分析发现，COX-2和CyclinD1基因的启动子上均有两个NF-кB的结合位点，抑制该部位蛋白表达可减弱COX-2和CyclinD1的表达，提示在诱导COX-2和CyclinD1的过程中NF-кB可能起重要作用。
　　 圈套寡脱氧核苷酸(decoy oligodeoxynucleotides，decoy ODNs)技术是近年来进行体内外基因调控研究的强有力工具，圈套寡脱氧核苷酸可竞争性的与转录因子特异性一致性序列结合，削弱转录因子与靶基因启动子的结合，从而下调靶基因的表达。
　　 目的：
　　 探讨NF-кB decoy ODNs联合顺铂对肺癌A549细胞的作用及机制，为临床运用提供实验依据。
　　 方法：
　　 1.设空白对照组、脂质体对照组、decoy ODNs组、scramble decoy ODNs组，干预肺癌A549细胞48h，免疫细胞化学法检测NF-кB p65的蛋白表达。
　　 2.设对照组、decoy ODNs组、顺铂组、decoy ODNs联合顺铂组，干预肺癌A549细胞48h后，半定量RT-PCR法检测Cyclin D1mRNA水平，免疫细胞化学法测COX-2蛋白表达，流式细胞仪检测细胞周期。
　　 结果：
　　 1.NF-кB p65蛋白表达：对照组、脂质体对照组及scramble decoy ODNs组高表达，显著高于decoy ODNs组(P均<0.05)，但三组间比较无统计学差异(P>0.05)。
　　 2.Cyclin D1mRNA水平：decoy ODNs组、顺铂组、decoy ODNs联合顺铂组均显著低于对照组(P均<0.05)；decoy ODNs联合顺铂组显著低于decoyODNs组和顺铂组(P均<0.05)；顺铂组低于decoy ODNs组(P<0.05)。
　　 3.COX-2蛋白表达：decoy ODNs组、顺铂组、decoy ODNs联合顺铂组显著低于对照组(P均<0.05)；decoy ODNs联合顺铂组显著低于decoy ODNs组和顺铂组(P均<0.05)；顺铂组低于decoy ODNs组(p<0.05)。
　　 4.流式细胞测细胞周期：decoy ODNs组、顺铂组、decoy ODNs联合顺铂组S期细胞比例增多，显著高于对照组(P均<0.05)，decoy ODNs联合顺铂组S期细胞比例高于decoy ODNs组及顺铂组(P<0.05，P<0.05)，顺铂组S期细胞比例高于decoy ODNs组(P<0.05)。
　　 结论：
　　 1.NF-кB decoy ODNs对肺癌A549细胞NF-кB p65的蛋白表达有明显抑制作用，提示NF-кB decoy ODNs可抑制NF-кB表达。
　　 2.NF-кB decoy ODNs和顺铂均可抑制CyclinD1及COX-2的表达，二者联合后该抑制作用明显增强，提示二者可能具有协同作用或相加作用。
　　 3.NF-кB decoy ODNs和顺铂均可引起A549的S期细胞阻滞，decoy ODNs可增加顺铂对A549的S期细胞阻滞。提示NF-кB decoy ODNs可增加A549细胞对顺铂的敏感性。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

前 言

材料和方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

综述部分

参考文献

个人简历

攻读硕士学位期间发表的学术论文及获奖情况

致谢