人脂肪间充质干细胞静脉移植治疗大鼠颅脑损伤的实验研究

摘要

目的:
　　 重型创伤性脑损伤的治疗是目前世界范围内的一个难题。由于脑损伤后病理过程复杂，神经元损伤的不可逆性，神经系统本身的再生能力差等方面的影响，在治疗方面面临许多难题。目前传统的治疗方法不能从根本上逆转神经元不可逆损伤这一病理机制，然而干细胞移植疗法却为这一医学难题带来了希望。近年来研究证实间充质干细胞对创伤性脑损伤具有一定的治疗作用。其中人脂肪间充质干细胞hADSCs(Human Adipose-Derived Stem Cells)较其他间充质干细胞有取材方便、伦理限制少、易提取培养、可自体移植等优点，且已有研究证明ADSCs在体外经适当诱导后能分化为神经元样细胞，故hADSCs有望成为治疗神经系统损伤新的种子细胞。
　　 分离培养hADSCs，并进行表面标志CD29、CD44、CD34、CD45、HLA-ABC、HLA-DR的检测。探索hADSCs经尾静脉移植后，对急性创伤性脑损伤大鼠行为学以及损伤脑组织中GFAP、NSE和Nestine等表达的影响。
　　 对象与方法:
　　 细胞的培养与鉴定：无菌条件下取成人远隔病变部位的废弃脂肪组织清洗、剪碎、消化、过滤制成单细胞悬液，最后将其移入含10％胎牛血清(fetal bovine serum， FBS)及20g/L碱性成纤维生长因子(bFGF)的DMEM/F12培养基的培养瓶中培养传代。取培养至第四代的ADSCs细胞采用流式细胞仪分析法检测细胞表面标志物：CD29、CD34、CD44、CD45、HLA-ABC、HLA-DR。
　　 动物模型的建立及分组：采用自由落体硬膜外撞击法制作大鼠脑创伤模型。将大鼠分为移植组、对照组、和生理盐水组。移植组于脑损伤48h时经尾静脉注射Brdu标记的成人脂肪间充质干细胞；对照组不作处理；生理盐水组于脑损伤48h时经尾静脉注射同等体积的生理盐水。
　　 采用NSS评分法评价大鼠神经功能恢复情况；倒置显微镜hADSCs在损伤脑组织内的迁移情况；免疫组织化学法检测大鼠受损脑组织中胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白的表达
　　 结果:
　　 原代培养的hADSCs24h后即可观察到细胞贴壁。48h后贴壁细胞逐渐伸展开，周围有脂滴沉淀。所培养的hADSCs，均匀地铺于培养界面上，生长均匀，形状规则呈长梭形，且生长增殖情况良好。约第7d时，hADSCs约80％融合，此时进行细胞传代。传代后th即可见细胞开始贴壁，贴壁细胞从圆形逐渐伸展为三角形、多角形、并逐渐变成梭形，均匀分布。经过较短的潜伏期后开始增殖。传代后的细胞增值速度明显较原代细胞快。
　　 CD29和CD44高表达，而CD34、CD45、HLA-ABC、HLA-DR表达极低，符合间充质干细胞表面抗原的一般情况。
　　 移植组与对照组及假手术组比较，NSS评分7d时无差异，14d、21d、28d时移植组明显低于其他两组；在受损伤的脑组织周围可发现经Brdu标记的hADSCs;移植组于移植后7d、14d、21d、28d时GFAP和NSE的阳性表达面积明显低于对照组和生理盐水组，以细胞移植后14d差异最为明显；移植组Nestin的阳性表达率在移植后7d开始增高，对照组和生理盐水组未见明显阳性表达；对照组和生理盐水组在GFAP、NSE、Nestin的阳性表达方面无差异。
　　 结论:
　　 (1)经过分离、培养的hADSCs符合间充质干细胞表面抗原的一般情况。
　　 (2)经尾静脉移植后，hADSCs可以进入受损大鼠的脑组织。
　　 (3)hADSCs对急性创伤性脑损伤大鼠具有一定的治疗效果。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

人脂肪间充质干细胞静脉移植治疗大鼠颅脑外伤的实验研究

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

附图

参考文献

综述 颅脑损伤的病生变化及脂肪间充质干细胞的研究现状

参考文献

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学习、工作情况

在学期间发表的文章

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