脐血CD34+细胞在MG患者胸腺移植裸鼠体内的分化研究

摘要

研究目的:重症肌无力(myasthenia gravis,MG)是器官特异性自身免疫性疾病,基本发生机制是机体产生针对乙酰胆碱受体(acetyl-choline receptor,AchR)的自身抗体,封闭了神经肌肉接头处乙酰胆碱与受体的结合,阻断神经递质的传递,导致肌肉收缩无力。70％-80％MG患者有胸腺异常增生或胸腺瘤,胸腺组织学检查可发现存在类似淋巴结结构的T细胞区和富含B细胞的生发中心。因此,胸腺已被认为是MG患者自身免疫性T细胞和B细胞的重要来源,并且是产生抗乙酰胆碱受体自身抗体的场所,是自身免疫的病灶部位之一,胸腺摘除术则成为治疗MG的主要手段。MG患者胸腺切除后,血清中抗AchR抗体水平迅速降低,多数患者症状好转,这些临床资料均支持胸腺切除术仍然是目前治疗MG的有效手段之一。将MG患者手术摘除的胸腺组织或制成的胸腺细胞悬液给联合免疫缺陷小鼠(SCID)肾脏被膜下移植,SCID小鼠出现某些肌无力症状,并可在小鼠血清中测得抗AchR抗体;从胸腺增生型MG患者胸腺组织中分离获得B细胞,在体外能诱导产生抗AchR抗体。更进一步证实异常增生的MG患者胸腺与自身抗体(抗AchR抗体)的产生存在因果关系。生发中心是B细胞识别抗原后活化、增殖、发生体细胞突变和亲和力成熟的场所,是外周免疫器官在识别抗原成熟免疫细胞活化后由淋巴细胞增殖形成的,正常情况下,胸腺组织应没有B细胞和生发中心存在。胸腺是干细胞向T细胞发育分化的主要场所,是维持机体正常T细胞数量和功能、维持自身生理平衡和自身耐受的重要器官。随着年龄的增长,胸腺逐渐萎缩,但其输出成熟T细胞的功能维持终生。由胸腺基质细胞、胸腺激素和细胞因子组成的胸腺微环境是保证T细胞在胸腺正常发育、分化与成熟的决定性因素。为深入探讨MG患者胸腺在疾病发生中的作用,本研究通过建立MG患者胸腺移植Balb/c裸小鼠动物模型,探讨MG患者胸腺对脐血CD34+细胞分化的影响。
　　方法:1、研究对象:选择临床诊断明确的MG患者,手术切除后胸腺病理学诊断为胸腺增生型。2、MG患者胸腺-裸鼠模型的建立:将1mm3无菌切除的MG患者胸腺组织行Balb/c裸小鼠左肾包膜下移植。3、脐血CD34+细胞的分选:无菌取健康足月产妇脐带血,分离单个核细胞,采用免疫磁珠法分选出CD34+细胞,流式细胞术鉴定细胞纯度。4、人胸腺-裸鼠模型静脉输注CD34+细胞:在胸腺移植2w后,给裸小鼠静脉输入人脐血CD34+细胞,每只小鼠输入细胞量为2×105。5、裸鼠体内人源淋巴细胞的检测:采用流式细胞仪检测人胸腺-裸鼠外周血中人源T细胞、B细胞、NK细胞、调节性T细胞数量。结果1、移植的胸腺组织在Balb/c裸小鼠肾包膜下存活:将MG患者胸腺移植至裸鼠肾被膜下后持续观察60d,小鼠未发生死亡,大体解剖见肾组织结构清晰,无显著出血和坏死,免疫组织化学染色显示移植块在肾组织存活,其中胸腺细胞表达CD3分子。2、MG患者胸腺-裸鼠模型外周血中人源淋巴细胞数量:流式细胞术结果显示CD3+、CD4+、CD19+、CD161+细胞以及CD3+CD56+、CD4+CD25+细胞百分率在MG患者胸腺、先天性心脏病胸腺与CD34+细胞联合移植组显著高于对照组,先天性心脏病胸腺移植组CD3+、CD19+百分率增加更显著,MG患者胸腺移植组CD4+细胞比例显著高于先天性心脏病胸腺移植组。
　　结论:成功将MG患者胸腺组织块植入Balb/c裸小鼠肾被膜下建立了人胸腺-鼠嵌合模型;移植的MG胸腺参与干细胞在体内的分化;该模型可作为MG胸腺功能研究、免疫细胞分化成熟研究的工具。

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摘要

Abstract

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结果

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参考文献

综述 人胸腺-鼠嵌合模型与T细胞分化

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