食管癌EC9706细胞系中核干细胞因子与碱性成纤维因子基因水平相互作用

摘要

核干细胞因子(nucleostemin,NS)是一种发现于胚胎干细胞、中枢神经干细胞、癌细胞等的定位于核仁的蛋白,特定情况下会释放入细胞质,已分化细胞和成熟组织细胞内没有发现。NS含有一个基本结构域。其功能与在核仁定位以及在生理条件下与P53相互作用有关。NS在干细胞和肿瘤细胞的细胞周期调控中扮演重要角色。碱性成纤维因子(FGF2)是最早发现的血管生成因子,研究显示FGF2在体内外可刺激内皮细胞的增殖、迁移、分化和血管生成;它还是一种分裂原,可以自分泌或旁分泌方式刺激多种肿瘤细胞的生长,在多种肿瘤组织中过度表达。研究蛋白信号网络的方法之一是研究蛋白的相互作用,蛋白质分子之间的相互作用主要包括分子的融合预杂交、分子识别、分子自我装配、多分子复合体、能量电荷的传递等等,这些作用具有重要生物学意义,这些相互作用都是通过分子表面的疏水键电荷等进行分子之间的相互作用,对这些相互作用除通过计算分子表面电荷及疏水基团暴露多少来检测外,也可应用数据库中已有数据进行预测,而研究蛋白的间接相互作用可以通过干扰一个蛋白表达观测另一个蛋白的表达来验证。人类食管癌,尤其是食管鳞癌,在世界范围内是致死率较高的癌症之一,在全球新确诊的食管癌患者中有超过1/2病例发生在中国。食管癌的发生是一种涉及多因素,多阶段的疾病,包括单纯增生,不典型增生,原位癌及浸润癌,其发生机制目前尚不清楚。为探究NS在信号通路、蛋白相互作用网络中的上下游蛋白,以EC9706细胞系为载体,利用RNA干扰的方法分别对干扰NS与FGF2后其表达的变化进行检测,并使用生物信息学中蛋白相互作用数据库推测其存在的直接相互作用,进而对其信号通路、蛋白相互作用网络中的上下游蛋白进行推测。
　　 目的：探究NS在信号通路、蛋白相互作用网络中的节点,探究NS与FGF2存在相互作用的可能。
　　 方法：应用RNA干扰技术构建沉默NS与FGF2的干扰表达载体,转染EC9706细胞,应用Real-time PCR检测与之对应的NS与FGF2的表达情况。运用数据库预测NS与FGF2存在直接相互作用的可能。
　　 结果：Realtime PCR结果显示,干扰NS的表达后NS的相对表达量为0.04±0.02.FGF2的相对表达量为0.26±0.24;干扰FGF2的表达后,NS的相对表达量为0.78±0.27,FGF2的相对表达量为0.27±0.31;对照组的NS相对表达量为1.05±0.14,FGF2相对表达量为1.13±0.19,差异具有统计学意义(P＜0.05)。结果表明干扰NS的表达会下调FGF2的表达,干扰FGF2的表达同时也会下调NS的表达。BioGrid3.0数据库、STRING8.3数据库、PIR数据库均预测出NS与FGF2相互作用。
　　 结论：结果表明NS和FGF2在基因水平间存在间接的相互作用。通过数据库的预测,提示NS可能与FGF2存在直接的相互作用。