KIM-1对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞MCP-1和FN表达的影响

摘要

背景与目的：
　　 糖尿病肾病(Diabeticnephropathy,DN)是糖尿病(Diabetesmellitus，DM)最常见、最严重的微血管并发症之一，是导致终末期肾脏病(Endstagerenaldisease，ESRD)和糖尿病患者死亡的主要原因，因此DN的防治日益受到人们的关注。糖尿病肾病主要的病理特征包括:肾小球肥大，基底膜增厚，细胞外系膜区基质的堆积，此外肾间质纤维化（Renalintersititialfibrosis，RIF）也是DN进展的重要的病理特征。长期的高糖会导致肾脏固有细胞包括肾小管上皮细胞分泌各种炎症因子及促纤维化因子，进而使细胞肥大、增生、细胞外基质（Extracellularmatrix，ECM）增多，促进RIF的发生。肾脏损伤因子-1（Kidneyinjurymolecule-1，KIM-1）是肾小管上皮细胞受到各种急慢性损伤时肾小管上皮细胞表达的一种新的Ⅰ型跨膜蛋白，不仅可以作为诊断急性肾损伤(Acutekidneyinjury,AKI)和慢性肾脏病(Chronickidneydisease，CKD)肾损伤程度的重要指标，而且还具有参与肾小管上皮细胞损伤与修复的功能。近年来大量研究发现KIM-1是介导包括DN在内的各种慢性肾脏病RIF重要的靶分子，但其具体的作用机制尚不清楚，现有的研究提示KIM-1可能与肾脏炎症反应有关，而细胞外基质（Extracellularmatrix，ECM）积聚是RIF的主要病理表现，故本实验以高糖环境模拟糖尿病条件，以大鼠肾小管上皮细胞为研究对象，观察KIM-1对高糖诱导肾小管上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(Monocytechemoattractantprotein-1，MCP-1)和纤维连接蛋白(Fibronectin，FN)表达的影响，探讨KIM-1参与糖尿病肾病RIF的可能机制，从而为治疗DN提供新的理论依据。
　　 方法：
　　 体外培养大鼠肾小管上皮细胞并进行如下分组:对照组(D-葡萄糖5.6mmol/L);高渗组(D-葡萄糖5.6mmol/L+D-甘露醇24.4mmol/L);高糖组(D-葡萄糖30mmol/L);ControlsiRNA组（转染ControlsiRNA，6h后换为高糖）;KIM-1siRNA组（转染KIM-1siRNA，6h后换为高糖）。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中MCP-1和FN蛋白的表达;Westernblot法检测细胞KIM-1蛋白的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞KIM-1、MCP-1、FNmRNA的表达。
　　 结果：
　　 1.正常对照组及高渗组几乎无KIM-1蛋白和mRNA表达;与正常对照组相比，高糖培养细胞12h时KIM-1蛋白和mRNA表达增多(P＜0.05)，48h时达到最高值(P＜0.05)。
　　 2.与正常对照组相比，高糖条件下MCP-1及FN蛋白和mRNA的表达于24h时显著增多(P＜0.05)，48h时达最高值(P＜0.05)。
　　 3与高糖组相比，KIM-1siRNA转染组MCP-1和FN蛋白和mRNA表达减少（P＜0.05）。
　　 结论：
　　 1.高糖刺激下肾小管上细胞KIM-1、MCP-1和FN表达增多。
　　 2.下调KIM-1的表达能显著抑制高糖条件下肾小管上皮细胞表达MCP-1和FN，提示KIM-1可能通过调控MCP-1及FN的表达参与糖尿病肾病RIF。

目录

封面

声明

摘要

主要符号和缩略语说明

1 前言

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

3．1 高糖条件下肾小管上皮细胞KIM-1蛋白和mRNA表达情况

3．2 高糖条件下肾小管上皮细胞MCP-1蛋白和mRNA表达情况

3．3 高糖条件下肾小管上皮细胞FN蛋白和mRNA表达情况

3．4 高糖条件下siRNA沉默KIM-1的效率检测

3．5 KIM-1 siRNA转染对高糖培养肾小管上皮细胞MCP-1蛋白和mRNA表达的影响

3．6 KIM-1 siRNA转染对高糖培养肾小管上皮细胞FN蛋白和mRNA表达的影响

4 讨论

5 结论

参考文献

综述

个人简历

致谢